固相合成多肽需要什么基因？多肽固相合成技术

固相合成多肽需要什么基因？多肽固相合成技术图2 固相多肽合成 2.以三苯甲基树脂树脂为载体的合成方法（图2） 三苯甲基(trt)树脂含有三重苄基结构，因此反应活性极高。一般用等摩尔量的保护氨基酸及4倍量的DIEA与Trt树脂混在二氯甲烷中，室温反应30-12Omin即达完全。对于未反应完全的位点，可用甲醇封住位点。基于Trt Linker的温和键合及温和裂解特点，在此种树脂上进行肤片段缩合及全保护基肤片段制备是较理想的方式。

固相合成多肽的聚合物载体及连接分子

1.聚合物载体 固相合成多肽需要有固相载体及连接固相与反应物的连接分子 正确选择载体和连接分子决定着固相合成法的成功。固相合成多肽用的载体多数采用聚苯乙烯及二乙烯基苯和苯乙烯共聚物等高聚物的衍生物 如氯 树脂、Pam树脂、王氏树脂和氨基树脂等。载体树脂的溶胀状况对缩合试剂及羧基组分的自由扩散 对肽链之间的聚集等与缩合反应有关的因素有明显影响。为了使载体有较好的溶胀性 且有较大的网络空间足以容纳不断增长的较长的肽链 而且便于反应物进入载体的内部 一般均采用1%～2%交联度的聚苯乙烯珠状树脂或微孔树脂。

2.连接分子 固相合成多肽曾经使用过键合不同连接分子的聚合物 这些连接分子为含有氯甲基、巯甲基、酰氯基、对苯甲酰基、芳磺酰氯基、烯丙醇基、丁二酰基、邻硝基苄醇基及二苯氯硅烷等的双官能团化合物。一个理想的连接分子必须在整个合成过程中十分稳定 并在合成后可以定量的切割下来而又不破坏合成的目标分子。选择适合的连接分子还应根据与树脂相连的肽的C末端的结构类型 裂解后生成相应的羧酸、酰胺或氨基醇等衍生物。

图1 固相多肽合成

2.以三苯甲基树脂树脂为载体的合成方法（图2）

三苯甲基(trt)树脂含有三重苄基结构，因此反应活性极高。一般用等摩尔量的保护氨基酸及4倍量的DIEA与Trt树脂混在二氯甲烷中，室温反应30-12Omin即达完全。对于未反应完全的位点，可用甲醇封住位点。基于Trt Linker的温和键合及温和裂解特点，在此种树脂上进行肤片段缩合及全保护基肤片段制备是较理想的方式。

图2 固相多肽合成

FMOC固相合成Glu-Trp

3以氨基树脂为载体的合成方法

MBHA树脂、PAL树脂、Knorr树脂、Rink-NH2树脂等均在Linker中含有可与羧酸反应的氨基。C端第一个氨基酸与之键合的反应条件与接肽循环中的操作完全相同。如果以DCC为缩合剂，一般先将N-保护氨基酸与DCC、HOBT混于溶剂(DMF、THF、DCM等)中，生成氨基酸的HOBT活泼酯，放置3-5h，待活化反应基本完全后滤除副产物DCU沉淀，把羧基活化组分溶液与氨基树脂混合进行键合反应。此步反应有两点事项值得注意:①多数氨基树脂的氨基并非以游离状态出售。有的氨基是以盐酸盐的形式，有的则带有临时保护基(如Fmoc Boc等），因此在与C端第一个氨基酸键合之前必须进行相应的中和或脱除临时保护基的处理;②氨基酸活化组分的用量应大大高于氨基树脂组分，一般的摩尔比为（2-5）：1，目的是使键合反应接近100% 因为未被酰化的氨基树脂无法从产物中清除出去。使用大大过量的构件是所有固相有机合成的共同之处。

除了DCC之外，其他常见的缩合剂还有DIC、EDC、EEDQ、HBTU等。

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