变形杆菌检测方法：普通变形杆菌和奇异变形杆菌的检验

变形杆菌检测方法：普通变形杆菌和奇异变形杆菌的检验普通变形杆菌和奇异变形杆菌在GN增菌液中36℃±1℃培养18-24h后生长浑浊，如图2所示：1、选择性增菌三、检验程序图1 普通变形杆菌和奇异变形杆菌检验程序四、检验方法和结果

一、参考标准

《SN/T 2552.8-2010 乳及乳制品卫生微生物学检验方法 第8部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌检验》

二、生物学特性

变形杆菌为能活泼运动而又极为多形性的一群肠道菌，有球形和丝状形，具有鞭毛、无荚膜、无芽胞、革兰氏阴性，运动活泼。在固体培养基上呈扩散生长，形成迁徙生长现象。

三、检验程序

图1 普通变形杆菌和奇异变形杆菌检验程序

四、检验方法和结果

1、选择性增菌

普通变形杆菌和奇异变形杆菌在GN增菌液中36℃±1℃培养18-24h后生长浑浊，如图2所示：

a:空白对照；b:普通变形杆菌；c:奇异变形杆菌 图2 GN增菌液的培养结果

2、初步生化鉴定

①SS琼脂试验

取增菌液1环，划线接种于SS平板上，于36℃±1℃培养18-24h，普通变形杆菌和奇异变形杆菌在SS平板上的典型菌落为：1mm-2mm大小、无色半透明或有黑色中心，边缘整齐，表面光滑的圆形菌落，如下图所示：

a:奇异变形杆菌

b:普通变形杆菌

②克氏双糖培养基试验

挑取SS平板上的可疑菌落，穿刺接种混合克氏双糖铁斜面，接种时先在斜面划线，然后再穿刺到底层放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，普通变形杆菌和奇异变形杆菌的试验现象为：斜面红/底层黄（部分区域黑色），发酵葡萄糖但不发酵乳糖同时产生硫化氢和产气，如图3所示。

注意：能产生硫化氢的菌应及时观察试验结果，以免生成的硫化铁形成黑色区域，遮盖斜面与底层的颜色影响判断结果。

a:空白对照；b:普通变形杆菌；c:奇异变形杆菌 图3 克氏双糖的培养结果

③尿素琼脂试验

挑取SS平板上的可疑菌落，穿刺接种尿素琼脂斜面，接种时先在斜面划线，然后再穿刺到底层放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，普通变形杆菌和奇异变形杆菌的试验现象为尿素培养基变玫红，如图4所示：

空白对照；b:普通变形杆菌；c:奇异变形杆菌 图4 尿素培养基的培养结果

④苯丙氨酸脱氨酶培养基试验

挑取SS平板上的可疑菌落，接种在苯丙氨酸脱氨酶培养基斜面划线，然后放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，培养结束后滴加4-5滴苯丙氨酸指示剂，使其覆盖培养基表面，1min-5min呈现绿色则为阳性，如图5所示：

a:空白对照；b:普通变形杆菌；c:奇异变形杆菌 图5 苯丙氨酸脱氨酶培养基的培养结果

3、进一步的生化鉴定

符合上一步要求的可疑菌落需进一步进行其他生化试验。

①靛基质试验

将菌接种于胰蛋白水培养基中，放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，滴加Kovacs氏靛基质试剂，立即观察反应结果。普通变形杆菌为玫红色环，为阳性；奇异变形杆菌为黄色环，为阴性，如图6所示：

a:空白对照；b:奇异变形杆菌；c:普通变形杆菌； 图6 靛基质的培养结果

②鸟氨酸脱羧酶试验

将菌接种于鸟氨酸脱羧酶生化管中，加无菌液体石蜡覆盖培养基液体表面，放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，接种普通变形杆菌的培养基呈阴性，培养基变黄；接种奇异变形杆菌的培养基呈阳性，培养基为紫色，如图7所示：

a:空白对照；b:奇异变形杆菌；c:普通变形杆菌 图7 鸟氨酸脱羧酶的培养结果

③甘露醇试验

将菌接种于鸟氨酸脱羧酶生化管中，放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，接种奇异变形杆菌和普通变形杆菌的培养基都呈阴性，培养基颜色为蓝色或蓝绿色，如图8所示：

a:空白对照；b:奇异变形杆菌；c:普通变形杆菌 图8 甘露醇的培养结果

④氧化酶试验

变形杆菌氧化酶试验不变色，为阴性，铜绿假单胞菌为阳性变蓝，如图9所示：

a:铜绿假单胞菌10104；b:奇异变形杆菌 图9 鸟氨酸脱羧酶的培养结果

普通变形杆菌和奇异变形杆菌生化鉴定表：

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