园艺植物穴盘育苗的参考文献：柠檬鳞伞生物学特性与驯化栽培

园艺植物穴盘育苗的参考文献：柠檬鳞伞生物学特性与驯化栽培参考文 献 的 方 法，利 用 ＩＴＳ１（ ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴＧＣ ）和 ＩＴＳ４（ ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ ）通用引物对柠檬鳞伞子实体分离菌株纯化菌丝 ＤＮＡ 进行 ＰＣＲ 扩增，所用引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，扩增产物由湖北擎科生物科技有限公司进行测序，并将测序 获 得的 ＩＴＳ 序 列 与 ＮＣＢＩ数 据 库 收 录 序 列 进 行 ＢＬＡＳＴ 比 对 分 析。自 测 序 列 和ＧｅｎＢａｎｋ下载的相关序列用 ＭＥＧＡ５．０５进行系统发育分析，用 ＮＪ （ ｎｅｉ ｇ ｈｂｏｒ － ｊ ｏｉｎｉｎ ｇ ）法构建系统发育树，进行 １０００ 次自展抽值检验系统发育树可靠性。图１ 野生柠檬鳞伞子实体１　 材料与方法１．１菌株来源及分子鉴定　　 柠檬鳞伞 （ Ｐ . ｌｉｍｏｎｅｌｌａ ）子实 体（图１）采自湖北省十堰市房县土城镇白鸡铺村（北纬

基金项目：柠檬鳞伞生物学特性与驯化栽培

基金项目：湖北省中央引导地方科技发展专项（２０１９ＺＹＹＤ０３９ ）、现代农业产业技术体系建设专项（ ＣＡＲＳ － ２０ ）、湖北省食用菌产业技术体系（２０２１ － ２０２４ ）综合试验站项目（ ＨＢＨＺＤＺＢ － ２０２１ － ０２３ ）和湖北省生物多样性本底调查观测评估项目

蔡 　 婧等

柠檬鳞伞（ Ｐｈｏｌｉｏｔａ ｌｉｍｏｎｅｌｌａ ）属于担子菌门（ Ｂａｓｉｄｉｏｍ ｙ ｃｏｔｉｎａ ）、层菌纲（ Ｈ ｙ ｍｅｎｏｍ ｙ ｃｅｔｅｓ ）、伞菌目（ Ａ ｇ ａｒｉｃａｌｅｓ ）、球盖菇科（Ｓｔｒｏ ｐ ｈａｒｉａｃｅａｅ ）、鳞伞属（ Ｐｈｏｌｉｏｔａ ） ，分布于中国东北 、美国东部 以及荷兰 等地。柠檬鳞伞为木腐菌，通体橙黄色，成簇生长在枯树上 ，暂无有毒记录。鳞伞属为广布属，全世界约 １５０ 种 。我国已知的鳞伞属真菌有 ６８ 种 。鳞伞属真菌不仅营养价值高，含有氨基酸、维生素、蛋白质及多糖等物质 ，还具有增强免疫力、抗肿瘤和抗氧化作用 。鳞伞属真菌种类较多，但驯化栽培成功的较少，已驯化成功的有多脂鳞伞（Ｐ . ａｄｉ ｐ ｏｓａ ）、小孢鳞伞（Ｐ . ｍｉｃｒｏｓ ｐ ｏｒａ ）、尖鳞伞（ Ｐ . ｓｑ ｕａｒｒｏｓｏｉｄｅｓ ）、白鳞伞（Ｐ . ｄｅｓｔｒｕｅｎｓ ）、翘鳞伞（Ｐ . ｓ ｑ ｕａｒｒｏｓａ ） 等。目前小孢鳞伞与多脂鳞伞已实现商业化栽培。笔者首次开展了柠檬鳞伞生物学特性和人工驯化栽培研究，以期为柠檬鳞伞的开发利用提供参考。

１　 材料与方法

１．１菌株来源及分子鉴定

　　 柠檬鳞伞 （ Ｐ . ｌｉｍｏｎｅｌｌａ ）子实 体（图１）采自湖北省十堰市房县土城镇白鸡铺村（北纬 ３２°２３ ' ２９ "，东经 １１０°７２ ' ２６"，海拔 ４６８ｍ ），参照文献的方法，将野生菌株子实体进行组织分离，得到供试菌株。

图１ 野生柠檬鳞伞子实体

参考文 献 的 方 法，利 用 ＩＴＳ１（ ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴＧＣ ）和 ＩＴＳ４（ ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ ）通用引物对柠檬鳞伞子实体分离菌株纯化菌丝 ＤＮＡ 进行 ＰＣＲ 扩增，所用引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，扩增产物由湖北擎科生物科技有限公司进行测序，并将测序 获 得的 ＩＴＳ 序 列 与 ＮＣＢＩ数 据 库 收 录 序 列 进 行 ＢＬＡＳＴ 比 对 分 析。自 测 序 列 和ＧｅｎＢａｎｋ下载的相关序列用 ＭＥＧＡ５．０５进行系统发育分析，用 ＮＪ （ ｎｅｉ ｇ ｈｂｏｒ － ｊ ｏｉｎｉｎ ｇ ）法构建系统发育树，进行 １０００ 次自展抽值检验系统发育树可靠性。

１．２生物学特性研究

１．２．１不同温度对菌丝生长的影响

　　 将一个柠檬鳞伞菌丝块（直径０．８ｃｍ ）接入ＰＤＡ平板（直径９ｃｍ ）中央，分别置于５ 、 １０ 、 １５ 、 ２０ 、 ２５ 、３０ 、 ３１ 、 ３２ 、 ３３ 、 ３４ 、 ３５℃培养箱培养，每组５个重复，观察菌丝长势，采用十字交叉法每两天在相同时间段内测量菌丝生长直径，当有菌丝长满时，停止测量，计算菌丝生长速度。

１．２．２不同碳源对菌丝生长的影响

　　 碳源培养基配方为 ２０ ｇ 碳源、 ２ ｇ 磷酸二氢钾、 ２ ｇ 七水硫酸镁、 ２０ ｇ 琼脂， １Ｌ 蒸馏水。实验碳源分别为葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、果糖、淀粉，以不加碳源为对照，每组５个重复，将一个直径为０．８ｃｍ 的柠檬鳞伞菌丝块接于ＰＤＡ平板（直径９ｃｍ ）中央，置于２５℃培养箱中培养，观察菌丝长势，按１．２．１的方法测定菌丝生长速度。

１．２．３ 不同氮源对菌丝生长的影响

　　 氮源培养基配方为 ２ ｇ 氮源、 ２ ｇ 磷酸二氢钾、 ２ ｇ 七水硫酸镁、 ２０ ｇ 琼脂， １Ｌ 蒸馏水。实验氮源分别为酵母浸粉、牛肉膏、蛋白胨、硝酸钾、尿素、草酸铵，以不加氮源为对照，每组 ５ 个重复，将一个直径为０．８ｃｍ 的柠檬鳞伞菌丝块接于ＰＤＡ平板（直径９ｃｍ ）中央，置于２５℃温培养箱中培养，观察菌丝长势，按 １．２．１ 的方法测定菌丝生长速度。

１．２．４ 不同 ｐ Ｈ 对菌丝生长的影响

　　 选用 ＰＤＡ 培养基，用 ０．１ｍｏｌ· Ｌ －１　 ＮａＯＨ 和 ０．１ｍｏｌ · Ｌ －１　 ＨＣｌ 将灭菌后培养基 ｐ Ｈ 分别调节到５．５ 、 ６．０ 、 ６．５ 、 ７．０ 和 ７．５ ，每组 ５ 个重复，将一个直径为 ０．８ｃｍ 的柠檬鳞伞菌丝块接于 ＰＤＡ 平板（直径 ９ｃｍ ）中央，置于 ２５℃ 培养箱中培养，观察菌丝长势，按 １．２．１ 的方法测菌丝生长速度。

１．３ 驯化栽培

　　 采用 １５ｃｍ×３０ｃｍ 聚乙烯折角栽培袋，装入培养料（ ８０％ 阔叶树木屑、 １９％ 麸皮、 １％ 石膏，含水量６０％ ），每袋装 ０．７５ｋ ｇ 湿料，共计 ２０ 袋， １２１℃ 灭菌 ２ｈ ，待袋内培养料温度冷却到 ２８℃ 以下时开始接种。每袋接入 ５ ｇ 柠檬鳞伞菌丝块，接种后将菌袋移入培养室，于（ ２５±１ ） ℃ 、黑暗条件下培养，测量菌丝生长速度 ，待菌丝长满袋后记录生长时间。将菌袋转移至出菇房，自然条件下开袋出菇，出菇期间环境温度为 １０～２２℃ ，相对湿度 ＞９０％ ，光照 ０～１２５ｌｘ 。记录原基形成时间，子实体采收时间，并计算产量和生物学效率。

１．４栽培子实体的形态特征观察

　　 用解剖刀纵切人工栽培的新鲜柠檬鳞伞子实体，观察其菇盖结构、菌肉颜色和质地，菌褶形状和着生情况，菌柄质地、中实或中空等特征；将菌褶放在洁净的载玻片中央，用乳酸酚棉兰染色，加盖玻片在光学显微镜下观察孢子、担子和菌褶（菌髓）等的形态特征。

２　 结果与分析

２．１ 菌株分子鉴定结果

　　 柠檬鳞伞ＩＴＳ序列长度为６９６ｂ ｐ ， ＧｅｎＢａｎｋ登录号为 ＭＺ１４８５７９ 。通过构建系统发育树，其与已报道的柠檬鳞伞在一个分支里，支持率为９９％ ，研究结果支持它们为同一物种（图２ ）。柠檬鳞伞和多脂鳞伞亲缘关系最近。结合形态学初步鉴定结果，所测菌株鉴定为柠檬鳞伞。

图２ 基于ＩＴＳ序列构建的系统发育树

２．２ 生物学特性

２．２．１不同温度对菌丝生长的影响

　　 由表１可知，在不同温度下培养，柠檬鳞伞菌丝生长速度和长势有所不同。柠檬鳞伞菌丝在５ ℃能生长，３４℃停止生长，生长最适温度为２５℃ 。

表 １　 不同温度对菌丝生长的影响

数据为平均值 ± 标准误（ ｎ＝５ ）；不同小写字母表示差异显著（ Ｐ ＜０．０５ ）； ＋ ：菌丝稀疏， ＋＋ ：菌丝密， ＋＋＋ ：菌丝浓密

２．２．２不同碳源对菌丝生长的影响

　　 不同碳源对柠檬鳞伞菌丝生长速度和长势的影响见表２ 。碳源为麦芽糖或蔗糖时，菌丝浓密且生长速度较快。

表２ 不同碳源对菌丝生长的影响

注同表 １

２．２．３不同氮源对菌丝生长的影响

　　 不同氮源对柠檬鳞伞菌丝生长速度和长势的影响见表３ 。氮源为硝酸钾时，菌丝生长速度最快，不同氮源下菌丝长势相同。

表３ 不同氮源对菌丝生长的影响

注同表 １

２．２．４不同 ｐ Ｈ 对菌丝生长的影响

　　 不同 ｐ Ｈ 对柠檬鳞伞菌丝生长速度和长势的影响见表４ 。在实验范围内， ｐ Ｈ 为７．０时，菌丝浓密且生长速度最快。

表 ４　 不同ｐＨ对菌丝生长的影响

注同表 １

２．３驯化栽培结果

　　 菌袋中菌丝生长速度为（ ０．３１±０．０３ ） ｃｍ · ｄ－１，约６０ｄ 后菌丝满袋；开袋 ２５～３０ｄ 后形成原基，３５～４０ｄ后子实体成熟。从接种到第一潮子实体采收需９０～１００ｄ ，本实验仅采收第一潮菇，每袋产量为（７２．０４±１３．３８ ） ｇ ，平均生物学效率为２４．０１％ 。

２．４ 栽培子实体形态学观察结果

　　 柠檬鳞伞人工栽培子实体与野生子实体 相比，形态特征基本一致，但人工栽培柠檬鳞伞的菌盖圆润、色深，菌柄粗长（图３ ）。人工栽培子实体菌盖直径４～７ｃｍ ，呈凸镜或近平展，初期呈红褐色，成熟后逐渐变为柠檬黄色，具散生的黄褐色与白色鳞片，黏。菌肉厚度 ４～７ｍｍ ，淡黄色。菌褶 ３．５～４．８ｍｍ ，直生至稍弯生，近白色，逐渐变为铁锈色，窄，密。菌柄长５～１２ｃｍ ，粗４～９ｍｍ ，上下等粗或下部稍细，灰白色至浅褐色，具散生反卷的黄色鳞片，实心或稍空心。菌环单层，白色，膜质，薄，生于菌柄上部，易消失。显微特征（图４ ）：孢子椭圆形至卵圆形， ４．５～７．２ μ ｍ×３．５～５．２ μ ｍ ，光滑；担子棒状，１３．８～２３．１ μ ｍ×３．８～６．３ μ ｍ 。

图３ 柠檬鳞伞发育过程中的不同形态

Ａ ：幼菇； Ｂ 、 Ｃ ：成熟子实体

图 ４ 柠檬鳞伞的菌落及显微形态特征

Ａ ：菌落； Ｂ ：担孢子（ ６４０× ）； Ｃ 、 Ｄ ：担子（ １６００× ）； Ｅ ：菌髓（ １６０× ）

３　 讨论

　　 在本实验范围内，柠檬鳞伞菌丝最适培养温度为 ２５℃ ，麦芽糖或蔗糖作为碳源时菌丝生长快且浓密，硝酸钾为氮源时菌丝生长最快，最适 ｐ Ｈ 为 ７．０ 。在碳源实验中发现，大多数真菌适宜生长的葡萄糖并不适合柠檬鳞伞生长，菌丝适合在双糖培养基上生长，这和在多脂鳞伞、翘鳞伞上的研究结果一致 。与野生柠檬鳞伞子实体相比，人工栽培柠檬鳞伞具有菌盖圆润、菌盖中部颜色更深，菌柄粗长等性状，这与栽培过程中光照、温度和湿度等环境因素有关。柠檬鳞伞的栽培尚停留在实验室阶段，存在产量低、形态差别大等问题，今后应进一步优化栽培条件，以提高栽培子实体产量和形态的稳定性。

鳞伞属真菌中部分种类可食用，如多脂鳞伞、小孢鳞伞等；少鳞黄鳞伞（ Ｐ . ａｌｎｉｃｏｌａ ）、金毛鳞伞（Ｐ . ａｕｒｉｖｅｌｌａ ）、杨树鳞伞（ Ｐ . ｐ ｏ ｐ ｕｌｎｅａ ）等有食用记载 。部分鳞伞属真菌食用后会产生毒性，如尖鳞伞、翘鳞伞有人食用后引起腹泻、腹痛 。恺生鳞伞（Ｐ . ａｌｎｉｃｏｌａ ）、黏皮鳞伞（ Ｐ . ｌｕｂｒｉｃａ ）、地鳞伞（ Ｐ . ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ ）、烧地鳞伞（ Ｐ . ｈｉｇ ｈｌａｎｄｅｎｓｉｓ ）和黄鳞伞（ Ｐ . ｆ ｌａｍｍａｎｓ ）被记载有毒 。柠檬鳞伞尚无有毒记载，其食用性有待进一步研究。