细胞凋亡流式检测实验步骤（准确的细胞凋亡检测方法）
细胞凋亡流式检测实验步骤（准确的细胞凋亡检测方法）流式Annexin V系列凋亡试剂盒基本原理细胞凋亡早期的特征之一是磷脂酰丝氨酸(phosphatidyl—serine，PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。而人膜联蛋白V(AnnexinV)对PS具有特异的亲和作用，将Annexin V进行荧光素——FITC标记，作为一敏感的探针可检测暴露在细胞膜表面的PS，利用流式细胞仪或者荧光显微镜观察细胞凋亡现象。这种方法不需要固定细胞，避免了因固定造成的假阳性等问题，结果亦更可靠，这是目前公认的灵敏、高效和成熟的凋亡细胞检测方法之一。
凋亡(Apoptosis)，或者说程序性细胞死亡，是细胞内建的防御机制之一，在生物的正常发育及疾病抵御中起到重要的作用。
凋亡是个复杂的过程，至少有两种主要途径 – 内在和外在 – 导致了程序性细胞死亡。目前至少有十数种检测细胞凋亡的方法，从大框架上讲，可以划分为基于细胞形态、生物学功能和生化标记三大类。
然而，每一种方法都有其优缺点，本文我们来介绍目前最受欢迎的亡检测手段之一——Annexin V/PI双染法。
基本原理
细胞凋亡早期的特征之一是磷脂酰丝氨酸(phosphatidyl—serine，PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。而人膜联蛋白V(AnnexinV)对PS具有特异的亲和作用，将Annexin V进行荧光素——FITC标记，作为一敏感的探针可检测暴露在细胞膜表面的PS，利用流式细胞仪或者荧光显微镜观察细胞凋亡现象。
这种方法不需要固定细胞，避免了因固定造成的假阳性等问题，结果亦更可靠，这是目前公认的灵敏、高效和成熟的凋亡细胞检测方法之一。
流式Annexin V系列凋亡试剂盒
Ø Annexin V凋亡检测单品
Ø Annexin V蛋白
实验数据：Annexin V-FITC/PI检测试剂盒分群效果优异
Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左) 或未加药 (右) 处理4 h，Annexin V-FITC/PI检测试剂盒染色后FCM检测。Annexin V-FITC单阳为早期凋亡细胞，Annexin V-FITC和PI双阳细胞为坏死或晚期凋亡细胞，PI单阳细胞为裸核细胞。
流式检测细胞凋亡的数据分析方法：
1) 选中所有颗粒，将FSC和SSC设置成对数坐标轴模式备用;
2) 将横轴和纵轴分别设成Annexin通道和PI通道(7-AAD与此类似)，选取双阴细胞群;
3) 在双阴细胞门中，将横轴和纵轴分别设成FCS和SSC，将数据呈现方式改为轮廓图，找到细胞碎片，划出碎片门，应用于所有细胞;
4) 在所有细胞中，反选碎片门，得到所有细胞;
5) 将横轴和纵轴分别设成Annexin通道和PI通道，参照未经药物处理的对照组，划出十字门，确定不同群细胞的比例。
应广大用户的强烈要求，中国科学院生物化学与细胞生物学苏州研究院可提供细胞凋亡检测服务。
送样方式
1. 自行送样
需提供活细胞（>1×106个），检测周期（含报告）1周
2. 邮寄送样
需提供活细胞（T25培养瓶，>1×106个），检测周期（含报告）2-4周
地址：江苏省苏州市工业园区金鸡湖大道99号苏州纳米城西北区10幢301 电话：0512-62800807
