胰蛋白酶的作用和原理：逐典小课堂细胞消化知多少

胰蛋白酶的作用和原理：逐典小课堂细胞消化知多少为了保持细胞活力，消化反应条件应与细胞接触的强度相匹配。通常的细胞消化策略：2.细胞传代以单层生长的细胞彼此之间以及与培养皿发生蛋白质接触，一般细胞长至80%-90%密度需要传代消化，贴壁细胞传代前，需要把细胞用消化试剂从培养容器表面解离出来，细胞得以分离成单个悬液传代至含新鲜培养基的新容器内。消化方法以酶解法为主，胰蛋白酶是最常用的解离试剂。图2.不同培养规模的细胞传代

自实体组织分离是动物细胞的主要来源，目前生物制药领域应用广泛的细胞株如CHO细胞、293细胞、Vero细胞等最初均分离自不同动物的组织器官。那如何最有效分离出想要的单细胞呢？无论是原代细胞获取还是成熟细胞株的消化传代，细胞消化都是关键的一环，今天逐典给大家整理一篇细胞消化大全，方便您更好的选择适合自己实验的产品。

细胞消化在不同领域的应用

1. 原代细胞

直接从生物体获取的组织更接近于生物体内的生活状态，且生物性状尚未发生很大改变，因此在药物筛选、细胞移植、类器官培养、肿瘤研究等众多领域备受欢迎。针对不同组织采用不同的消化酶能使解离过程更加高效，酶解法也是主要的细胞解离方式，主要以胰蛋白酶为主，辅助添加其他蛋白酶增强活力。

2.细胞传代

以单层生长的细胞彼此之间以及与培养皿发生蛋白质接触，一般细胞长至80%-90%密度需要传代消化，贴壁细胞传代前，需要把细胞用消化试剂从培养容器表面解离出来，细胞得以分离成单个悬液传代至含新鲜培养基的新容器内。消化方法以酶解法为主，胰蛋白酶是最常用的解离试剂。

图2.不同培养规模的细胞传代

通常的细胞消化策略：

• 小规模的细胞收集可使用吹打或细胞刮刀
• 形成蛋白紧密连接的，可采用胰蛋白酶
• 上皮细胞等可表达钙粘蛋白的细胞，在酶消化基础上需添加EDTA等螯合剂

为了保持细胞活力，消化反应条件应与细胞接触的强度相匹配。

如果将反应强度与细胞系的粘附特性相匹配，但细胞仍难以去除，则在生长培养基中可能存在抑制胰蛋白酶的元素，例如血清，可以通过在添加解离试剂之前用PBS简单地冲洗细胞一次或两次来克服。此外，形成特别强的多层细胞融合也是需要注意的。

毫无疑问，胰蛋白酶作为原代细胞获取、细胞传代消化中必不可少的原料之一，在生物制药工艺中也是重要的生产原辅料。应用于生物制药工艺意味着更高的质量标准，动物来源、药典要求、生产级别、批间稳定性等都是胰蛋白酶产品的重要指标！

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• 直接替代胰蛋白酶消化流程，培养基稀释即可，无需酶活抑制剂
• 没有动物来源成分，极大程度上减少外来污染
• 应用范围广，适合有血清或无血清环境的细胞消化

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