聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理,DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳介绍
聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理,DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳介绍(二)注意事项6.分析 取下凝胶,切除凝胶的一角作为标记。染色、分析。3.聚合 立即插入适当的梳子。室温下静置聚合5~20分钟。4.上样 向电泳槽中加入电泳缓冲液,小心拔出梳子。用电泳缓冲液冲洗点样孔。然后上样。5.电泳 开始时电压为8V/cm凝胶,染料泳动至胶底约1cm时,停止电泳。
DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳介绍
(一)操作规程
1.清洗装配 用去污剂、水洗净玻璃板,晾干。然后按照要求装好。洗涤及装配玻璃板时必须戴手套。
2.制胶 确知玻璃板的大小和间隔片的厚度,可以得知所需丙烯酰胺溶液的体积(100mL不同浓度凝胶的制备)。
3.聚合 立即插入适当的梳子。室温下静置聚合5~20分钟。
4.上样 向电泳槽中加入电泳缓冲液,小心拔出梳子。用电泳缓冲液冲洗点样孔。然后上样。
5.电泳 开始时电压为8V/cm凝胶,染料泳动至胶底约1cm时,停止电泳。
6.分析 取下凝胶,切除凝胶的一角作为标记。染色、分析。
(二)注意事项
1.电泳前 ①整个操作过程中必须戴手套,未聚合的丙烯酰胺为神经毒性,可通过皮肤吸收,其作用具累积性。聚合的丙烯酰胺无毒,但也应戴手套,因其可能含有未聚合材料。②灌注凝胶时要防止凝胶的泄漏,灌注前可用水测试一下。③一定要检查电极的连接,正负极要对应。④要先倒电泳缓冲液,然后上样,再设定电泳条件接通电源。⑤调电流电压时,不要超出额定范围。
2.电泳时 ①电泳过程中会产生大量的热,应将电泳槽放入冷藏室或冰上进行电泳。②在电泳过程中,电泳装置如有异常发热,立即关闭电泳仪。
3.电泳后 取出凝胶时要非常小心,以免凝胶破裂影响分析。