文章选题方法，如何撰写研究原著类文章的方法部分

文章选题方法，如何撰写研究原著类文章的方法部分Western blot流程：∴Western blot蛋白印迹法（免疫印迹）对“材料/对象和方法”部分进行可重复性描述还利于审稿专家评估稿件的质量高低。如果审稿人对于实验方法提出强烈质疑，那么不管实验结果多么激动人心，审稿专家也会建议编辑拒绝录用稿件。下面简单介绍几种常见的实验方法所应具备的步骤描述：常用检测技术：

实验方法是搜集科学事实，检验科学假说，形成科学理论的实践基础，因而简洁、清晰、准确地撰写研究原著类文章的“材料/对象和方法”部分方法对于此类文章来讲，是十分重要的。

对实验方法的描述应达到以下目的：

（1） 允许读者重复实验，再现论文结果，做到所描述的实验方法在相同条件下可被他人复制；（2）使读者相信实验结果可靠，且令人信服；（3) 使读者受益于实验材料和方法的介绍，以从中得到启发，从而引发进一步的思考和研究。

那么，什么是撰写“材料/对象和方法”部分最需要注意的问题呢？那就是要在描述实验方法时，在不赘述的情况下，提供尽可能多的细节，也就是必须提供能让他人重复实验的基本步骤。

对“材料/对象和方法”部分进行可重复性描述还利于审稿专家评估稿件的质量高低。如果审稿人对于实验方法提出强烈质疑，那么不管实验结果多么激动人心，审稿专家也会建议编辑拒绝录用稿件。

下面简单介绍几种常见的实验方法所应具备的步骤描述：

常用检测技术：

∴Western blot蛋白印迹法（免疫印迹）

Western blot流程：

方法描述的基本要求：

从XX细胞/XX组织中提取蛋白质，用RIPA裂解和提取缓冲液（KeyGen Biotechnology，中国南京）处理。用BCA方法测定蛋白浓度。等量蛋白质通过SDS-PAGE分离后，转移到PVDF膜上（EMD Millipore公司，Burlington MA），然后用牛血清白蛋白（BSA，5%，v/v）封闭膜 。用适当稀释度的一抗在4℃下过夜孵育膜，然后将膜与二抗在室温下孵育1小时。ECL化学发光试剂盒（Thermo Fisher Scientific）进行曝光显影。最后使用ImageJ（National Institutes of Health Bethesda MD USA）对蛋白条带进行半定量分析，最终结果以目的蛋白与内参的吸光度比值表示（蛋白归一）。(注：一抗和二抗应说明抗体名称，动物种属，生产厂家（城市、国家），工作浓度，目录号及RRID号)

样例见网站：https://www.cjter.com/CN/news/news29719.shtml

∴Quantitative real-time PCR 实时定量 PCR

1.Quantitative real-time PCR流程：

2.方法描述的要求：

*qPCR实验方法应当按照“qPCR实验操作和文章发表指南：MIQE清单”中的要求进行，其必备的描述包括：

2.1 样本采集、处理和制备：样本来源于哪个物种、器官、组织。并简要描述样本，例如：肿瘤样本描述肿瘤细胞组织比例。RNA提取于新鲜组织还是冰冻组织（如果是冰冻，如何冰冻，冻了多长时间）。

2.2 核酸的质量控制：RNA的提取（操作环境、试剂、耗材中有无RNAase）、RNA的定量（有何种方法定量，量是多少），去除基因组DNA（gDNA）（描述gDNA污染程度。RNA样本是否经过DNase处理（包括DNase类型和反应条件）），质量评估（质量评估方法和结果。推荐使用凝胶电泳或微流控芯片rRNA分析），杂质残留（通过稀释样本做反转录来检测PCR抑制剂的存在，或者用SPUD等抑制试验）。

2.3 反转录：描述反转录的方法和试剂，包括：RNA模板量、引物种类、酶的类型与数量，反应体系及反应的时间和温度。

2.4 qPCR：基因信息（靶基因和参考基因的数据库登陆号（如：NCBI Gene数据库：基因id和序列的Accession Number），目标核酸的结构，目的基因长度）。引物信息（序列和浓度，结合位点。染料或探针：染料种类、探针序列）。实验设计（内参基因的选择、复孔、阴性阳性对照 ）。反应体系及反应条件（聚合酶的名称和浓度、模板量、缓冲液化学组成，反应体系总量，反应温度及循环数(initial denaturation预变性-denaturation变性- annealing退火- extension/ elongation延伸）。仪器耗材（塑料耗材的透明度如货品，反应容器为单一管，排管还是板，制造商；当使用板时，还要提供板的密封方法）。

2.5 数据分析：标准曲线（对第一对引物制作标准曲线来分析扩增效率）。实验组和对照组的Ct（Cq）值 。数据计算方法和归一化方法。数据重复性如何。统计方法和计算软件。

术语统一：

1.qPCR指的是实时荧光定量PCR，RT-qPCR指反转录qPCR。

2.用于归一化的基因叫做参考基因（reference gene），而不是管家基因（housekeeping gene）。

3.TAQMAN探针应称为水解探针。

4.FRET是荧光共振能量转移探针（fluorescence resonance energy transfer probe）的总称 ，5.LightCycler-type探针应称为双杂交探针。

6.定量单词不用“quantitation” 而用“quantification” 。

方法描述的要求主要来源：http://www.360doc.com/content/19/0322/18/52645714_823433224.shtml

样例见网站：https://www.cjter.com/CN/news/news29719.shtml

∴TUNEL染色

TUNEL染色流程：

(1)细胞：

(2)组织：

下面简单介绍几种常见的实验方法所应具备的步骤描述：

常用检测技术：

∴Western blot蛋白印迹法（免疫印迹）

Western blot流程：

方法描述的基本要求：

从XX细胞/XX组织中提取蛋白质，用RIPA裂解和提取缓冲液（KeyGen Biotechnology，中国南京）处理。用BCA方法测定蛋白浓度。等量蛋白质通过SDS-PAGE分离后，转移到PVDF膜上（EMD Millipore公司，Burlington MA），然后用牛血清白蛋白（BSA，5%，v/v）封闭膜 。用适当稀释度的一抗在4℃下过夜孵育膜，然后将膜与二抗在室温下孵育1小时。ECL化学发光试剂盒（Thermo Fisher Scientific）进行曝光显影。最后使用ImageJ（National Institutes of Health Bethesda MD USA）对蛋白条带进行半定量分析，最终结果以目的蛋白与内参的吸光度比值表示（蛋白归一）。(注：一抗和二抗应说明抗体名称，动物种属，生产厂家（城市、国家），工作浓度，目录号及RRID号)

样例见网站：https://www.cjter.com/CN/news/news29719.shtml

∴Quantitative real-time PCR 实时定量 PCR

1.Quantitative real-time PCR流程：

2.方法描述的要求：

*qPCR实验方法应当按照“qPCR实验操作和文章发表指南：MIQE清单”中的要求进行，其必备的描述包括：

2.1 样本采集、处理和制备：样本来源于哪个物种、器官、组织。并简要描述样本，例如：肿瘤样本描述肿瘤细胞组织比例。RNA提取于新鲜组织还是冰冻组织（如果是冰冻，如何冰冻，冻了多长时间）。

2.2 核酸的质量控制：RNA的提取（操作环境、试剂、耗材中有无RNAase）、RNA的定量（有何种方法定量，量是多少），去除基因组DNA（gDNA）（描述gDNA污染程度。RNA样本是否经过DNase处理（包括DNase类型和反应条件）），质量评估（质量评估方法和结果。推荐使用凝胶电泳或微流控芯片rRNA分析），杂质残留（通过稀释样本做反转录来检测PCR抑制剂的存在，或者用SPUD等抑制试验）。

2.3 反转录：描述反转录的方法和试剂，包括：RNA模板量、引物种类、酶的类型与数量，反应体系及反应的时间和温度。

2.4 qPCR：基因信息（靶基因和参考基因的数据库登陆号（如：NCBI Gene数据库：基因id和序列的Accession Number），目标核酸的结构，目的基因长度）。引物信息（序列和浓度，结合位点。染料或探针：染料种类、探针序列）。实验设计（内参基因的选择、复孔、阴性阳性对照 ）。反应体系及反应条件（聚合酶的名称和浓度、模板量、缓冲液化学组成，反应体系总量，反应温度及循环数(initial denaturation预变性-denaturation变性- annealing退火- extension/ elongation延伸）。仪器耗材（塑料耗材的透明度如货品，反应容器为单一管，排管还是板，制造商；当使用板时，还要提供板的密封方法）。

2.5 数据分析：标准曲线（对第一对引物制作标准曲线来分析扩增效率）。实验组和对照组的Ct（Cq）值 。数据计算方法和归一化方法。数据重复性如何。统计方法和计算软件。

术语统一：

1.qPCR指的是实时荧光定量PCR，RT-qPCR指反转录qPCR。

2.用于归一化的基因叫做参考基因（reference gene），而不是管家基因（housekeeping gene）。

3.TAQMAN探针应称为水解探针。

4.FRET是荧光共振能量转移探针（fluorescence resonance energy transfer probe）的总称 ，5.LightCycler-type探针应称为双杂交探针。

6.定量单词不用“quantitation” 而用“quantification” 。

方法描述的要求主要来源：http://www.360doc.com/content/19/0322/18/52645714_823433224.shtml

样例见网站：https://www.cjter.com/CN/news/news29719.shtml

∴TUNEL染色

TUNEL染色流程：

(1)细胞：

(2)组织：

来源：《中国组织工程研究》杂志