blot实验技巧（实验小白白巧度）

blot实验技巧（实验小白白巧度）我亲自为数百人提供过实验步骤方面的帮助。我花了上千个小时通电话、写电子邮件和分析用户数据。几年来，我每周进行了 80 多次染色质免疫沉淀，运行了成千上万个 PCR 周期。如今我把所有这些经验都变成知识，并传授给你们。使用我们的 ChIP 试剂盒和抗体，你可以就按我曾经做的方法来获得和我们说明书上一样优秀的结果。表1：ChIP试剂盒一开始，我在每个实验步骤中都可能犯错。有时候染色质剪得太小了，有时候又没有把染色质片段剪切到足够小；有时候在剪切缓冲液中使用了太多的去垢剂，有时候又使用了太少的去垢剂；有时候在免疫沉淀步骤中没有添加足够的抗体，有时候又在免疫沉淀步骤中添加太多的抗体……有一次，我在 DNA 洗涤步骤中甚至忘记了更换离心柱，把我那刚刚分离出准备用于 PCR 的 ChIP DNA 直接转入了废乙醇中，做了两天的实验和养了两周的细胞都给白白作废了。甚至还出现过使用了品质低劣的磁珠、离心柱

当你需要证明目的蛋白可以直接调节基因表达时，大概会悻悻地暗想：“Oh no! 要做ChIP实验了……”

对，就是染色质免疫沉淀，就连实验名称也很长，看着就让人气馁。不过不用担心，振作起来，带上护目镜，拿上移液管，有办法让你轻松、帅气地拿下实验。

对于每项实验，一开始，我们都是小白出身，拿我来说，以前我只研究蛋白，常用方法也就是WB和IF，从没有做过ChIP 实验。

后来在做ChIP实验的过程中，问题也层出不穷：对于每次免疫沉淀，我需要多少细胞？那么多？！我可以少用点吗？原代细胞怎么样？组织怎么样？天哪，我是不是还在第一个步骤？这个实验到底有多少个步骤？

一开始，我在每个实验步骤中都可能犯错。有时候染色质剪得太小了，有时候又没有把染色质片段剪切到足够小；有时候在剪切缓冲液中使用了太多的去垢剂，有时候又使用了太少的去垢剂；有时候在免疫沉淀步骤中没有添加足够的抗体，有时候又在免疫沉淀步骤中添加太多的抗体……

有一次，我在 DNA 洗涤步骤中甚至忘记了更换离心柱，把我那刚刚分离出准备用于 PCR 的 ChIP DNA 直接转入了废乙醇中，做了两天的实验和养了两周的细胞都给白白作废了。甚至还出现过使用了品质低劣的磁珠、离心柱和 PCR 试剂，导致实验质量大大降低的情况。大家都知道，做科研，我们没有过多时间可以浪费，也没有那么多科研经费容我们试错，所以每当遇到这样挫败的时候，我都心想，“唉，到底是为了啥，我为什么要做这个？”

因为我犯过这些错误，浪费了不少时间，所以我不希望你们重蹈覆辙。Cell Signaling Technology（CST） 有我协助开发和改进的试剂盒的专用实验步骤。我们找到了最佳的试剂，并装在我们的 ChIP 试剂盒（表1）中。我们知道需要多少细胞才能真正获得良好的结果，发现了为什么我们的低去垢剂剪切缓冲液优于传统的商品级缓冲液，我们会滴定所有抗体来确定你们实验所需的最佳用量（这个量根据抗体本身的亲和力不同而有所变化），也知道构建一个 ChIP-seq 库需要多少毫微克的免疫沉淀 DNA。你在实验中可能出现的诸多问题，我们在实验台前也已经弄明白了。

表1：ChIP试剂盒

我亲自为数百人提供过实验步骤方面的帮助。我花了上千个小时通电话、写电子邮件和分析用户数据。几年来，我每周进行了 80 多次染色质免疫沉淀，运行了成千上万个 PCR 周期。如今我把所有这些经验都变成知识，并传授给你们。使用我们的 ChIP 试剂盒和抗体，你可以就按我曾经做的方法来获得和我们说明书上一样优秀的结果。

有时，当我的试剂不足时，我会直接到我们的物流部取一个试剂盒箱。如果你也出现这样的情况，不妨浏览一下我们的网站。查看我们提供的实验步骤、ChIP 试剂盒和抗体。给这个“令人气馁”的实验配上所需的所有工具。