银屑病护理文献（治疗银屑病在皮损组织中的表达）

银屑病护理文献（治疗银屑病在皮损组织中的表达）产品使用说明书操作 切片脱蜡 抗原修复 滴加即用型过氧化物酶阻断液 室温孵育 10min PBS 液洗 滴加10% 正常非免疫动物血清 室温孵育 10min PBS 液洗 加入一抗 4e 冰箱过夜 加入二抗 室温孵育 10min PBS 液洗 滴加链霉素抗生物素- 过氧化物酶室温孵育 10min 二氨基联苯胺 ( DAB) 显色 苏木素复染 脱水 透明 封片后光镜下观察并摄片。PBS 液代替一抗作为阴性对照。113 实验方法 所有标本经 10% 福尔马林固定 石蜡包埋 前 20 片弃去 连续切 10 片取 1 片 切片厚约 4Lm 黏附于涂有APES 的载玻片上 烘烤过夜。PCNA、Bcl- 2、Cas-pase- 3 染色采用链霉素亲生物素- 过氧化物酶( SP) 法 按1 资料和方法111临床病例 收集 2002 年4 月~ 2003

摘要: 目的 探讨银屑病经光化学疗法( PUVA) 治疗后细胞增殖和凋亡相关指标表达的趋势。方法 应用免疫组化技术检测 30 例寻常型银屑病经PUVA 治疗前后及 10 例正常皮肤中 PCNA、Bcl- 2、Caspase3 的表达。结果在正常表皮中 Bcl- 2 和 PCNA 在基底层阳性表达 但在寻常型银屑病皮损中 Bcl- 2 表达明显低于正常皮肤组 皮损经 PUVA 治疗后的表达恢复 有显著性统计学意义(P< 0101) ; PCNA 在银屑病皮损为角质形成细胞广泛阳性表达 皮损经 PUVA 治疗后表达恢复 治疗前后有显著性统计学意义(P< 0101) ; Caspase3 在寻常型银屑病皮损与正常皮肤的表达无显著性统计学意义(P> 0105) 皮损处与经 PUVA 治疗后皮肤的表达相比有显著性统计学意义(P< 0101) 。结论 银屑病经 PUVA 后 Caspase3 表达增加 PCNA、Bcl- 2、表达恢复正常。

关键词:Bcl- 2; Caspase3; 增殖细胞核抗原; 光化学疗法; 银屑病

银屑病是遗传与环境等多种因素作用的多基因遗传病 其发生机制可能是一种免疫介导性疾病; 银屑病损害处表皮增厚并覆有明显的鳞屑 提示本病的表皮角质形成细胞的增殖和分化有明显的异常。我们应用免疫组化技术检测了银屑病皮损和正常人表皮角质形成细胞以及光化学疗法( PUVA) 治疗后 Caspase- 3、bcl- 2 和 PCNA 的表达情况

结果报告如下。

1 资料和方法

111临床病例 收集 2002 年4 月~ 2003 年 10 月我院皮肤

科门诊、住院收治的寻常型银屑病患者共 30 例( 银屑病组) 年龄6~ 52 岁 平均 32 岁 男 17 例 女13 例 病程8d~29 年 经临床和病理证实。切取皮损处皮肤以制作标本。30 例患者用 8% 甲氧沙林液( 重庆华邦制药有限公司生产)涂擦皮损 30min 后 照射黑光( UVA) 即 PUVA 治疗 隔日 1次 连续 10~ 15 次。取皮损消退处皮肤( 治疗组) ; 正常人皮肤标本来自我院整形外科手术患者( 正常组) 共 10 例 男 4 例 女 6 例 年龄 15~ 49 岁。112 试剂 PCNA 抗体( 鼠抗人增殖细胞核抗原单克隆抗体) Bcl- 2 抗体( 鼠抗人 Bcl- 2 单克隆抗体) Caspase- 3抗体( 鼠抗人 Caspase- 3 抗体) SP( 链霉素亲生物素- 过氧化物酶) 工作试剂盒等均购自北京中山生物技术责任有限公司。

113 实验方法 所有标本经 10% 福尔马林固定 石蜡包埋 前 20 片弃去 连续切 10 片取 1 片 切片厚约 4Lm 黏附于涂有APES 的载玻片上 烘烤过夜。PCNA、Bcl- 2、Cas-pase- 3 染色采用链霉素亲生物素- 过氧化物酶( SP) 法 按

产品使用说明书操作 切片脱蜡 抗原修复 滴加即用型过氧化物酶阻断液 室温孵育 10min PBS 液洗 滴加10% 正常非免疫动物血清 室温孵育 10min PBS 液洗 加入一抗 4e 冰箱过夜 加入二抗 室温孵育 10min PBS 液洗 滴加链霉素抗生物素- 过氧化物酶室温孵育 10min 二氨基联苯胺 ( DAB) 显色 苏木素复染 脱水 透明 封片后光镜下观察并摄片。PBS 液代替一抗作为阴性对照。

114 结果判定 Caspase3 以细胞胞浆着色 bcl- 2 以细胞胞膜着色 PCNA 以细胞核着色 有棕黄色颗粒物质沉积为阳性。参照Garcia[ 1] 等评分方法: 按染色强度将无、弱、中、强、极强分别记为 0~ 4 分; 再按阳性细胞比例将 0、1% ~25% 、26% ~ 50% 、51% ~ 75% 、76% ~ 100% 分别记为 0~ 4分 最后将相加得分的 0~ 2 分、3~ 4 分、5~ 6 分、7~ 8 分分别记为- 、 、 、 。

115 统计学方法 应用 SPSS 1010 统计学软件包对所有数据进行处理。各组计数资料的结果采用非参数秩合检验。以 P< 0105 为差异有统计学意义。

2 结果

211Caspase3 免疫组化染色结果( 图 1 见封 2)Caspase3

在寻常型银屑病皮损、PUVA 治疗后、正常皮肤中的表达阳性率分别为 43133% 、100% 、3010% 。银屑病组患者皮肤的表达率与正常组差异无统计学意义(P> 0105) 其与治疗组皮肤的表达率差异有统计学意义(P< 0101) 。212Bcl- 2 免疫组化染色结果 ( 图 2 见封 2)Bcl- 2 在正常表皮基底细胞为阳性 棘细胞层染色阴性 银屑病中基底层细胞染色阳性率减低。寻常型银屑病皮损、皮损经 PUVA 治疗后、正常皮肤中基底细胞的 Bcl- 2 阳性表达率分别为 13133% 、90% 、90% 。Bcl- 2 在银屑病组的染色阳性率明显低于正常组 经 PUVA 治疗后其表达恢复正常 治疗前后阳性表达率具有统计学意义(P< 0101)。