猪传染病微生物学诊断方法（猪繁殖与呼吸综合征流行现状及分子流行病学研究）
猪传染病微生物学诊断方法（猪繁殖与呼吸综合征流行现状及分子流行病学研究）五、青岛易邦实验室近三年的ORF5基因测序结果分析四、类NADC30、类NADC34毒株致病力分析国内类NADC30毒株CHsx1401在实验室条件下攻毒，21天内猪只并没有出现死亡，致病性低于HP-PRRSV毒株[12]，类NADC30毒株HNjz15 也得到相似的结果[13]。国内类NADC34致病性：国内类NADC34毒株 HLJDZD32 -1901 对仔猪致病性中等且低于类NADC30 PRRSV[14]。另一个类NADC34毒株ZDXYL-China-2018-1的攻毒实验证明，与HP-PRRSV株相比，并未引起攻毒猪的死亡，是一种中等毒力毒株。单个毒株或许并不能代表一类病毒的毒力，但以目前国内的实验结果来推测，各 PRRSV 亚型对仔猪的致病性的排序为：HP-PRRSV>类NADC30 PRRSV>类NADC34 PRRSV。二、美国蓝耳病谱系研究美国有专家统计了
猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)于1987年在美国首次报道，随后欧洲和亚洲等各地陆续报道了本病的发生。1991年荷兰学者和美国学者先后分离和确定了本病的病原。
PRRSV为有囊膜的单股正链RNA病毒，属于套式病毒目，动脉炎病毒科，分为两个基因型：Genotype1和Genotype2。Genotype1也称为欧洲型，Genotype2也称为美洲型。美洲型蓝耳病病毒按照ORF5序列，分为至少9个谱系(lineage1～9)和37个亚谱系(sublin-eage)；Nsp2是PRRSV 中最长且变异程度最大的非结构蛋白，不同PRRSV的Nsp2基因具有显著的差异，也可作为分类依据。
一、PRRSV在我国的流行自20世纪90年代中期在我国发生和流行以来，已经20余年。据田间流行优势毒株的不同，可大致分为三个阶段：经典毒株流行阶段（1996-2006年）、高致病性毒株（HP-PRRSV）流行阶段（2006-2013年）、类NADC30和高致病性毒株共同流行阶段（2013年至今）。
我国有关PRRS的描述最早见于1995年，代表性的分离毒株分别为CH-1a、BJ-4[1 2 3]，均为美洲型毒株。2006 年之后出现的高致病性毒株（HP-PRRSV）给我国养猪业造成了重大危害，代表毒株为JXA1、HUN4。2008年，NADC30毒株首次于美国爱荷华州爆发呼吸系统疾病的猪群中发现，2013年之后，类NADC30毒株开始在我国流行[4]。2014年，类NADC34毒株在美国爆发流行，对美国的养猪业造成巨大损失[5]，2017年，张洪亮教授团队在辽宁省首次检测到类NADC34毒株，2019-2020年，福建、黑龙江、河南等省份都分离到类NADC34毒株[6 7 8 9]。我国的流行毒株总体分属于四个谱系：lineage1、lineage3、lineage5、lineage8。目前lineage1(类NADC30毒株等)和lineage8(HP-PRRSV等)是当前田间主要的流行毒株，其中lineage1谱系是当前的优势谱系。
二、美国蓝耳病谱系研究美国有专家统计了美国2009-2019年的27875个蓝耳病序列，其中PRRSV-2（美洲型）为26853个，占比96.3%，对其中的26831个PRRSV-2序列进行了进一步分析，美国的流行毒株总体分属于三个谱系：lineage1、lineage5、lineage8，与中国的情况不同，谱系1占据了样本中的大部分[10]。
三、限制性片段长度多态性（RFLP）分析的原理及应用
蓝耳病的RFLP分型是根据酶MluI、HincII和SacII在ORF5限制位点上的酶切模式形成3个数字代码[11]。基因谱系是基于ORF5分子特征的遗传进化分析，RFLP是基于ORF5基因的多态性分析。中美两国在PRRSV分类模式上存在差别，中国以分子特征（Nsp2缺失和ORF5序列比对）分型，美国以RFLP(ORF5)进行分型。以类NADC34为例，当前类NADC34毒株ORF5基因以RFLP1-7-4居多，但同时也存在1-4-4、1-7-2、1-7-3等类型，RFLP 分类方式无法代表具有同一致病特性的一类毒株， RFLP基因分型在深入了解病毒的致病性方面无效，以分子特征（Nsp2缺失和ORF5序列比对）分型更符合当前国内复杂的疾病形式。
四、类NADC30、类NADC34毒株致病力分析国内类NADC30毒株CHsx1401在实验室条件下攻毒，21天内猪只并没有出现死亡，致病性低于HP-PRRSV毒株[12]，类NADC30毒株HNjz15 也得到相似的结果[13]。国内类NADC34致病性：国内类NADC34毒株 HLJDZD32 -1901 对仔猪致病性中等且低于类NADC30 PRRSV[14]。另一个类NADC34毒株ZDXYL-China-2018-1的攻毒实验证明，与HP-PRRSV株相比，并未引起攻毒猪的死亡，是一种中等毒力毒株。单个毒株或许并不能代表一类病毒的毒力，但以目前国内的实验结果来推测，各 PRRSV 亚型对仔猪的致病性的排序为：HP-PRRSV>类NADC30 PRRSV>类NADC34 PRRSV。
五、青岛易邦实验室近三年的ORF5基因测序结果分析
结果分析：
①各个基因型占比情况：2019、2020年高蓝的比例仍高于类NADC30，2021年起NADC30比例高于高致病性蓝耳病，类NADC30毒株已经成为国内主流。
②类NADC34检出情况：2020年检测到2%类NADC34毒株，2021年检测到3.33%。可以推测，随着猪场的复养和国外引种增加，类NADC34毒株的威胁将逐渐增加。
六、欧洲型蓝耳病病毒（PRRSV1）在我国的流行情况1991年，荷兰学者分离到毒株 Lelystad virus(LV)并完成了全基因组测序［15］。此后，欧洲多国先后分离到PRRSV1。我国有关欧洲型毒株的研究相对较少，Zhou Z等于2011年分离到四株PRRSV1毒株［16］。Wang X．等从 2011 年的样本中分离到一株与疫苗毒株 Amervac 核苷酸序列高度同源的 PRRSV1 毒株 GZ11-G1，怀疑与引进疫苗免疫种猪有关[17]。2014年Nan hua Chen等从发病猪的血清里分离到一株Amervac疫苗毒与田间毒株BJEU06-1的重组毒株[18]，这提示我们需要加强国外引种的蓝耳病监测。
随着荧光定量PCR等检测方法的应用，PRRSV1的检出变得普遍。其中广东[19]和广西[20]地区的检测显示欧洲型 PRRSV在中国存在扩散，可能会造成该病毒在一定区域内的流行，给养猪场带来一定的危害。
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