广州常用细胞凋亡检测实验步骤(常用细胞凋亡检测方法-DNA片断化检测)
广州常用细胞凋亡检测实验步骤(常用细胞凋亡检测方法-DNA片断化检测)4、ApoAlertTM LM-PCR Ladder Assay (CLONTECH)优点:敏感度高,适合于检测少量样本,小部分凋亡细胞。如临床活组织检测。
细胞凋亡时主要的生化特征是其染色质发生浓缩 染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂 形成50~300kbp长的DNA大片段 或180~200bp整数倍的寡核苷酸片段 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(DNA ladder)。细胞经处理后,采用常规方法分离提纯DNA,进行琼脂糖凝胶和溴化乙啶染色,在凋亡细胞群中可观察到典型的DNA ladder。如果细胞量很少,还可在分离提纯DNA后,用32P-ATP和脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)使DNA标记,然后进行电泳和放射自显影,观察凋亡细胞中DNA ladder的形成。
1、大分子染色体DNA片段的测定
细胞凋亡的早期 染色体断裂成为50~300 kbp长的DNA大片段。所有超过一定分子量大小的双链DNA分子在琼脂糖凝胶中的迁移速度相同。线性DNA的双螺旋半径超过凝胶半径时,即达到分辨力的极限。此时凝胶不再按分子量的大小来筛分DNA,DNA像通过弯管一样,以其一端指向电场一极而通过凝胶,这种迁移模式称之为"爬行"。因此,细胞凋亡早期产生的50~300 kbp长的DNA大片段不能用普通的琼脂糖凝胶电泳来分离。通常采用脉冲电泳技术可圆满地解决这一问题。这个方法是在凝胶上外加正交的交变脉冲电场。每当电场方向改变后,大的DNA分子便滞流在爬行管中,直至新的电场轴向重新定向后,才能继续向前移动。DNA分子量越大,这种重排所需要的时间就越长。当DNA分子变换方向的时间小于电脉冲周期时,DNA就可以按其分子量大小分开。
PI染色流式分析凋亡
4、ApoAlertTM LM-PCR Ladder Assay (CLONTECH)
优点:敏感度高,适合于检测少量样本,小部分凋亡细胞。如临床活组织检测。