实时荧光定量pcr所需材料（实时荧光定量PCR实验流程及检测方法）

实时荧光定量pcr所需材料（实时荧光定量PCR实验流程及检测方法）(4)荧光定量PCR仪对目的基因的检测;(3)探针法和染料法的选择;3.荧光定量PCR检测;(1)引物和探针的设计与合成;(2)绝对定量和相对定量的选择;

实时荧光定量PCR是检测生物样品中DNA、RNA含量的最普遍的方法，通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。

荧光定量PCR原理

通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，通过标准曲线对未知模板进行定量分析。Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。

实时荧光定量PCR服务内容

1.从动物细胞、人或动物组织等样品中提取核酸;

2.对核酸进行浓度及纯度分析;

3.荧光定量PCR检测;

(1)引物和探针的设计与合成;

(2)绝对定量和相对定量的选择;

(3)探针法和染料法的选择;

(4)荧光定量PCR仪对目的基因的检测;

(5)数据统计和分析;

4.预实验服务：根据客户提供的目的基因序列或NCBI序列号提供客户引物和探针，并筛选出优化的引物和探针;

5.正式实验服务：根据预实验筛选的引物和探针对所用样品进行荧光定量PCR的检测，并对结果进行统计和分析。

荧光定量PCR检测方法

1.SYBRGreenⅠ法：

在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

2.TaqMan探针法：

探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。

荧光定量PCR应用

实时荧光定量PCR是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量分析技术。随着分子生物学技术的不断发展，实时荧光定量PCR技术以其便携、快速高效、准确灵敏等优势，越来越受到人们的重视，在环境监测、医学等领域，生物及食品领域等方面具有重要的应用价值。

定性分析

1.病毒及病原菌检测

2.物种鉴定

3.基因分型

定量分析

绝对定量的应用

1.病毒及病原菌定量分析

2.导入基因拷贝数解析

3.GMO定量解析

相对定量的应用

1.差异显示结果验证

2.基因芯片结果验证

3.siRNA效果确认

4.mRNA表达量分析