睡眠剥夺鼠模型（睡眠剥夺SD小鼠模型建立方法）

睡眠剥夺鼠模型（睡眠剥夺SD小鼠模型建立方法）实验周期：4-6 weeks老年小鼠，将小鼠置于水池中的倒置花盆平台（直径2.5cm）上，该花盆被充满水的树脂玻璃室包围，可自由获取食物和水。 水温保持在30±1℃。其中水位仅为表面下3cm。时间为48~72h。免疫组织化学检测：取含海马体的全脑组织，石蜡包埋，每只切三片后做GFAP的免疫组化，对切片进行全景扫描。

原型物种：人

来源：物理单平台（倒置花盆平台）形成的睡眠碎片化

模式动物品系：SPF级Balb/c 小鼠，健康，雄性。

实验分组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。

实验周期：4-6 weeks

建模方法

老年小鼠，将小鼠置于水池中的倒置花盆平台（直径2.5cm）上，该花盆被充满水的树脂玻璃室包围，可自由获取食物和水。 水温保持在30±1℃。其中水位仅为表面下3cm。时间为48~72h。

模型评价

1. Morris水迷宫试验检测小鼠学习记忆能力定位航行实验：小鼠连续接受5天的训练，每天4次，每次时间间隔30min，记录下小鼠从4个入水点和入水并找到平台所需要的时间，即逃避潜伏期。4次潜伏期的平均成绩作为当日的最终结果进入到最后统计。空间探索实验：实验的第6天，撤去平台，从距离平台的最远端入水后，将小鼠放入水中，记录下30s内小鼠的游泳轨迹，并观察分析小鼠在目标象限的停留时间，以及它的穿越平台的次数。

2. 伊文思蓝(EB)检测血脑屏障(BBB)通透性2% EB染料（4ml/kg）经小鼠尾静脉注射。3h后待染料充分经过血循环后，用0.2ml戊巴比妥钠腹腔注射，并用50ml生理盐水通过左心室进行灌注后取全脑。将全脑浸于1ml甲酰胺。样品于37℃孵育2h后，甲酰胺混悬液经420000*g离心20min，测量全脑在632nm的吸光度。EB染料含量根据甲酰胺内EB的标准曲线计算（0~4μg/ml）。

组织病理学

免疫组织化学检测：取含海马体的全脑组织，石蜡包埋，每只切三片后做GFAP的免疫组化，对切片进行全景扫描。