内毒素的检测与鲎试验（鲎试剂在细菌内毒素检查法中的使用方法）

内毒素的检测与鲎试验（鲎试剂在细菌内毒素检查法中的使用方法）[3]张红霞 陈慧 马金刚.影响鲎试剂灵敏度测定结果因素的分析.中国药师 2007 10(8):825-826.[2] 卫生部.部标准《鲎试剂》修订稿. WS1-364(B-123)-91.选择合适的操作方法与顺序，在鲎试剂的使用过程中尤为重要。在操作过程中要注意以下几点:【参考文献】[1] 梁苹 蔡红.鲎试剂灵敏度对细菌内毒素限量检查的影响.华西药学杂志 1999 14(3):204-204.

一、鲎试剂在细菌内毒素检查法中的正确使用

内毒素检查法结果准确与否与所用鲎试剂的灵敏度相关性很大[1]，而鲎试剂的灵敏度与它的正确使用又密切相关。所以，一定要严格执行鲎试剂的质量标准，规范使用鲎试剂。

（一）保证所使用鲎试剂的质量

鲎试剂的质量主要表现在其灵敏度、自凝时间与成胶状态三个方面:灵敏度稳定；自凝时间不低于24h[2]；具有一定的缓冲能力与合适的pH；反应后即形成坚实凝胶，将成胶安瓿翻转180°而不会被破坏。而质量稍差的鲎试剂存放一定时间后（如半年）其灵敏度可能发生变化，而灵敏度的改变会使测定结果所反映的供试品中内毒素的允许限值发生变化[3]。因此，需选择具有国家颁发的批准文号，质量稳定的鲎试剂。

（二）对鲎试剂灵敏度进行监测性复核

由于不同厂家鲎试剂质量不尽相同，即便是相同厂家不同批号的鲎试剂也有差异，这便导致鲎试剂灵敏度复核值与标示值不尽一致，因此鲎试剂的复核值对检测结果有显著影响[4]。每使用新批号鲎试剂时应复核其灵敏度；对留样鲎试剂自生产之日起，每6个月进行一次灵敏度检测，其灵敏度在有效期内应符合规定。有研究表明，鲎试剂的灵敏度在符合标准规定及适当的贮存条件下，3年内其灵敏度变化不大，是稳定的。建议可适当延长其有效期[5，6]。因此，对鲎试剂灵敏度进行监测性复核有利于确保实验的准确性。

（三）使用过程正确操作

选择合适的操作方法与顺序，在鲎试剂的使用过程中尤为重要。在操作过程中要注意以下几点:

1. 实验室要求洁净、无尘埃流通；检验人员同时注意卫生的保持。在整个使用操作过程中应防止微生物的污染，例如空气的流动，人员的口沫、汗液污染等。
2. 鲎试剂开启、溶解和配制时应尽量避免将安瓿外瓶壁脏物、瓶壁碎片、砂轮锯屑等异物混入鲎试剂中，避免鲎试剂外损。
3. 鲎试剂中含有多种蛋白质，用力振摇会产生气泡，一旦起泡难以消除，而影响检测的准确性，所以在整个操作过程中都要轻力以避免因过分震动而引起的误差。
4. 量取和加样反应物时，一定要加到试管底部接近鲎试液而不接触鲎试液的管壁处。
5. 生成凝胶的最适pH值为6~-8，对于氯化钠注射液、葡萄糖注射液（5%，10%）等注射液，不需考虑供试液的pH值，而检查其他制剂时，尤其是一些本身缓冲能力较强或偏酸、碱的供试品，应考虑供试品的pH值[5]。
6. 使用时要严格控制温度和时间。当鲎试剂一加入内毒素及样品混合液中时反应已开始，并在一定的温度范围内，反应温度越高，反应速率越大；保温时间的增长，也会提高鲎试剂的灵敏度，增加假阳性的发生[7]，导致较大误差。因此，要注意控制温度的变化和保温时间。
7. 保持实验器具的洁净。每次检验完毕，应及时将玻璃器具允分清洗后于250℃干热灭菌处理，待烤箱温度升至设定的温度后开始计时，十烤至少1h[8]。也可用其他经确证不十扰细菌内毒素的检查的适宜方法。

【参考文献】

[1] 梁苹 蔡红.鲎试剂灵敏度对细菌内毒素限量检查的影响.华西药学杂志 1999 14(3):204-204.

[2] 卫生部.部标准《鲎试剂》修订稿. WS1-364(B-123)-91.

[3]张红霞 陈慧 马金刚.影响鲎试剂灵敏度测定结果因素的分析.中国药师 2007 10(8):825-826.

[4] 程义琳 吴蕙玲.鲎试剂灵敏度对检测结果的影响.中国药师 2005 8(4): 344-345.

[5] 陈引秀.鲎试剂灵敏度稳定性的考察.海峡药学 2004 16(3): 83-84.

[6] 金华.鲎试剂灵敏度稳定性观察.医学理论与实践，2004，17(1):84-84.

[7]黄冬 房判石.鲎试剂法检测细菌内毒素假阳性原因浅析.首都医药 2002 9(5): 53-54.

[8]中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范.北京:中国医药科技.

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