糊精对多肽含量测定（环糊精增溶小分子化合物的机理研究）
糊精对多肽含量测定（环糊精增溶小分子化合物的机理研究）因此药物在贮存和运输过程中不易泄漏，所以逐步取替了原始的脂质体技术。但是，固体脂质纳米技术的研究手段还不够成熟。固体脂质纳米技术是一种新型给药体系，是将合成或者天然的脂质态纳米颗粒作为载体，该体系的优点是毒性较小，可以被生物体利用，有较好的靶向作用，由于药物被包裹在固体脂粒的囊泡中。大部分天然植物色素无毒害且安全，并且能够增强生物体的营养摄入具有独特的保健功效，上色也很自然。研究人员发现，很大一部分天然植物色素具有抗氧化能力以及一定的药理作用，例如抗癌症、抗毒、抗辐射等。因此天然植物色素在生产生活尤其是在食品领域的应用逐渐受到研究人员的重视。但是，由于天然植物色素水溶性差、生物体吸收不好、生物利用率低和临床应用效果不佳，使新药的研发受到了限制和阻碍所以增大难溶性植物色素水溶性的方法是急需解决的一个重要问题。1.2.1固体脂质纳米技术
1.1植物色素天然植物色素广泛存在于水果、蔬菜、中草药的叶、花、皮和果实中，体现出多姿多彩的颜色，天然植物色素是人类历史上使用最早的食用型色素，然而随着科学技术的飞速发展，由于人工合成色素具有成产成本低廉的特性。
食用色素逐渐由天然物质转变为人工合成物质，在食品工业上人工合成色素逐步取替了原生态色素。但是，随着生活品质的不断提高，消费者们需要的不仅仅是商品的数量，更渴望商品能够达到质的飞跃。
渴望日常食物能够绿色、健康、原生态，而天然色素通常来说容易获取，具有较高的安全性和营养价值以及良好的药用保健功能，正好符合当代消费者绿色生活的要求。因此，各国开始重视提倡使用天然植物色素作为食用色素来提高食品的安全性。
天然植物色素可以根据溶解性的大小分为水溶性色素和脂溶性色素；按结构特征可以划分为酮类、醌类、吡咯、多酚及多烯类色素；按照来源可以分为水果、蔬菜以及药材类等。
大部分天然植物色素无毒害且安全，并且能够增强生物体的营养摄入具有独特的保健功效，上色也很自然。研究人员发现，很大一部分天然植物色素具有抗氧化能力以及一定的药理作用，例如抗癌症、抗毒、抗辐射等。
因此天然植物色素在生产生活尤其是在食品领域的应用逐渐受到研究人员的重视。但是，由于天然植物色素水溶性差、生物体吸收不好、生物利用率低和临床应用效果不佳，使新药的研发受到了限制和阻碍所以增大难溶性植物色素水溶性的方法是急需解决的一个重要问题。
1.2.1固体脂质纳米技术
固体脂质纳米技术是一种新型给药体系，是将合成或者天然的脂质态纳米颗粒作为载体，该体系的优点是毒性较小，可以被生物体利用，有较好的靶向作用，由于药物被包裹在固体脂粒的囊泡中。
因此药物在贮存和运输过程中不易泄漏，所以逐步取替了原始的脂质体技术。但是，固体脂质纳米技术的研究手段还不够成熟。
由于中药的组成比较复杂，评估固体脂质颗粒的包封效果和包封药量的多少是很关键的，而且脂质态颗粒载体在体内的代谢途径尚未可知，在临床应用中的风险也是无法预估的。
1.2.2超微粉技术
微粉化技术是近现代以来随着科学技术的发展而产生的一种新技术，该技术是将药物粉碎至极其细小的颗粒来增大药物的水溶性以及生物利用率 所以在制作过程中常常通过研磨过筛等方式将药物微粉化。
但是由于天然药物种类较多，成分比较复杂，可以应用超微粉末技术处理的药物有限。比如该如何确保有毒的药物在粉碎过程中具有毒性的成分不被溶出。
对于相对分子质量比较大的天然药物，如何确定颗粒要粉碎到多小能使利用程度达到最大且结构又不会遭到破坏，这些问题对超微粉末技术的应用都具有一定程度的影响。
1.2.3环糊精包合技术
环糊精（Cyclodextrin，CD）是由α-1 4糖苷键连接而成的天然环状低聚糖，最常见的是α-CD、β-CD和γ-CD。其结构是环形或者锥形的，由于C-H的屏蔽作用，中心有疏水空腔，环糊精分子外部小口端C6的伯羟基和大口端C2和C3的仲羟基使其外表面具有亲水性。
因此具有“内腔疏水，外部亲水”的独特性质，这种独特的结构使环糊精能够作为主体与大小、结构、电荷、极性相匹配的客体分子形成非共价配合物，它们之间通过范德华力和氢键结合在一起，主体分子将客体分子的全部或者部分包裹在其空腔中从而形成包合物。
主体分子是指具有包合能力的物质，本文中指环糊精分子，客体分子是指能够被包合进主体分子空腔内小分子化合物，本文中指木犀草素（Luteolin Lut）、川陈皮素（Nobiletin Nob）、杨梅素（Myricetin Myr）、山奈酚（Kaempferol Kae）。
甲基-7-甲氧基异黄酮（5-Methyl-7-methoxyisoflavone 5MIF）和姜黄素（Curcumin Cur），环糊精与小分子化合物形成复合物之后对小分子化合物的水溶性、稳定性和物理化学性质都具有一定的影响，一般来说二者形成复合物之后。
- 既不影响药物本身的药理活性，又能降低不良反应，无副作用产生，同时可降解，对生物基本上没有毒害，并且有利于增强难溶性小分子化合物的生物利用率。因此，环糊精具有越来越广泛的应用范围，但是天然环糊精具有一定的局限性。
- 应用起来并不是很理想，比如α-CD内部空腔较小，对包合的小分子化合物的形状和尺寸有要求；γ-CD分子空腔较大，能够包合很多客体药物，但是成本较高，不利于工业上批量生产；β-CD分子内部空腔大小适中，应用广泛，成本较低，但是水溶性不好。
限制了其实际应用。为了弥补这些天然环糊精的不足之处，提高它们的水溶性及包合能力，研究人员对糊精进行改性处理和化学修饰，在保证天然环糊精自身结构不发生改变的前提下，用其它基团代替环糊精分子上的氢来合成化学衍生物。
从而增强环糊精的包合特性同时使其得到了更广泛的应用，如heptakis-O-（2，6-二-O-甲基）-β-环糊精（DM-β-CD）和heptakis-O-（2-羟丙基）-β-环糊精（2HP-β-CD），既保留了内部疏水的空腔又提高了稳定性和水溶性。
理化性质以及各方面的改善使其具有更好的应用前景。正因为环糊精及其衍生物的无毒、价低、安全等优势，因此被广泛应用于食品、医药、化妆品、工业生产等行业。本文中就是采用此方法，即利用环糊精的包合技术提高天然植物色素小分子难溶性化合物的溶解度。
下图中的是本论文所研究的β-CD、γ-CD 、DM-β-CD、2HP-β-CD、6Glu-β-CD五种环糊精。通过实验基本证实木犀草素（Lut）、杨梅素（Myr）、川陈皮素（Nob）、山奈酚（Kae）、5-甲基-7-甲氧基异黄酮（5MIF）和姜黄素（Cur）与α-CD并不存在相互作用。
1.3研究目的与意义天然植物色素药理活性很好，不良反应较小，因此在抗菌、抗癌、抗病毒和抗氧化等方面体现出了良好的应用前景，对心脑血管疾病有显著的治疗功效，不仅能够调节免疫力而且还可以抗疲劳、抗衰老、抗糖尿病、治疗尿酸过多。
在提高免疫力和中药研发等方面的应用前景比较好。在近几十年里，我国自主研发的新药中绝大部分与这些天然植物色素药物有关，因此将这些天然植物色素的利用率最大化就成了当今需要探讨的热点问题。近年来随着对天然植物色素的深入研究。
研究人员发现本身具有较高药理活性的天然植物色素一般都是溶解度比较小、相对分子质量比较大的，由于好多化合物的水溶性并不是很理想，影响生物体吸收，利用率较小，这大大影响了天然植物色素的开发以及实际应用。
因此研究提高难溶性化合物溶解度的方法是目前应该解决的问题，这对于医学领域的探索和医药的开发研制都具有重要的意义。
本文采用环糊精对Lut、Nob、Myr、Kae、5MIF和Cur这六种难溶性药物的增溶来提高药物在生物体的利用率，为这六种化合物的以后的科学研究提供了基本的数据，同时也为工业生产提供了一个想法和思路。
2.2.1储备液的制备
首先精确称量一定量的2HP-β-CD粉末于50 ml一次性聚丙烯管中，用二次去离子水将其配制为1.0×10-2 mol/L的溶液，以备实验过程中稀释待用，同理，采用以上方法配制DM-β-CD、6Glu-β-CD、β-CD和γ-CD的储备液。
然后将乙醇和水以3:7的比例配制成百分之三十的乙醇水溶液，以上储备液均在0°C左右低温保存。2.2.2绘制相溶解度曲线以Lut为例，说明相溶解度图法。用天平称100份1.0 mgLut于15.0 ml管中（五种环糊精，五种浓度，平行做四组实验）。
加入浓度分别为0、5.0×10-4、1.0×10-3、1.5×10-3、2.0×10-3和2.5×10-3 mol/L的五种环糊精储备液，这五种环糊精分别为β-CD、γ-CD、2HP-β-CD、DM-β-CD和6Glu-β-CD，超声20 min让溶液达到平衡。
将上述溶液于25 °C、4000 rpm条件下离心20 min后静置，取上清液用紫外-可见分光光度计检测其在特定波长处的紫外吸收，每组实验平行重复四次，空白对照是超纯水，最后设定横轴为环糊精浓度，纵轴为Lut浓度得到相溶解度图。
同理，对其它五种小分子药物进行相溶解度曲线的绘制。称取相同份数1.0 mg的植物色素小分子化合物，在Nob中加入2HP-β-CD、DM-β-CD和6Glu-β-CD三种环糊精，浓度均为0、2.0×10-3、4.0×10-3、6.0×10-3、8.0×10-3和1.0×10-2 mol/L。
在Myr中加入2HP-β-CD、DM-β-CD、β-CD和γ-CD四种环糊精，浓度均为0、2.0×10-3、4.0×10-3、6.0×10-3、8.0×10-3和1.0×10-2 mol/L；实验过程中发现Kae和5MIF含水量较大导致粘度较大不易称量。
因此采用2.0 mg进行实验，在Kae中加入2HP-β-CD、DM-β-CD、β-CD和γ-CD四种环糊精，浓度均为0、1.0×10-3、2.0×10-3、3.0×10-3、4.0×10-3和5.0×10-3 mol/L；在5MIF中加入2HP-β-CD、DM-β-CD、6Glu-β-CD、β-CD和γ-CD五种环糊精。
浓度均为0、1.0×10-3、2.0×10-3、3.0×10-3、4.0×10-3和5.0×10-3 mol/L；在Cur中加入2HP-β-CD、DM-β-CD、β-CD和γ-CD四种环糊精，浓度均为0、1.0×10-2、2.0×10-2、3.0×10-2、4.0×10-2和5.0×10-2 mol/L，其它实验操作方法均与Lut一致。
2.2.3绘制标准曲线
精确称量一份质量为1.0 mg的Lut放在15 ml离心管中，向其中加入10.0 ml配制好的30%的乙醇溶液，将其作为原溶液，再将该溶液稀释到2、4、5、8、12.5、20、25、40倍，同理，将Nob原溶液稀释到2、4、5、8、10、12.5、40倍。
将Myr原溶液稀释到5、8、10、12.5、20、25、40、80、160、200、250、400、500倍，另外精确称量一份质量为2.0 mg的Kae，向其中加入10.0ml配制好的30%的乙醇溶液，将其作为原溶液。
将该溶液稀释到8、10、12.5、20、25、40、80、160、200、250、400、500倍，同理取2 mg 5MIF用相同方法配制成原溶液。
将其稀释到5、8、10、12.5、20、25、40、80、160、200、250、400、500倍，将Cur原溶液稀释到4、5、8、10、12.5、20、25、40、80、160、200，进行标准曲线的绘制，并求出各个药物的S0。
选取对Lut、Nob、Myr、Kae、5MIF和Cur增溶效果最好的环糊精进行红外光谱分析，分别按照物质的量比为环糊精：药物：KBr= 1：1：100的比例于红外光灯下混合研磨压片测定。简单混合均匀制得物理混合物，研磨时间1 h 制得复合物。
