蛋白质透析的方法：蛋白质的透析
蛋白质透析的方法：蛋白质的透析Ø 把需要透析的样品盛于透析袋内，袋内留有挤去空气的空余部分，以防由于溶剂渗入造成样品体积增加而引起透析袋胀破。Ø 保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。Ø 透析是膜技术的一种，利用透析膜可以选择性的透过一定大小分子，从而将待分离纯化的物质和杂质离子分离开。Ø 常见的透析有：蛋白质的透析和糖类的透析。Ø 透析是利用半透膜进行的一种选择性扩散操作，通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。
一、实验目的
ü 了解透析技术的一般原理。
ü 通过蛋白质透析实验掌握透析操作。
二、实验原理
Ø 透析是膜技术的一种，利用透析膜可以选择性的透过一定大小分子，从而将待分离纯化的物质和杂质离子分离开。
Ø 常见的透析有：蛋白质的透析和糖类的透析。
Ø 透析是利用半透膜进行的一种选择性扩散操作，通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。
Ø 保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。
Ø 把需要透析的样品盛于透析袋内，袋内留有挤去空气的空余部分，以防由于溶剂渗入造成样品体积增加而引起透析袋胀破。
Ø 为了获得较快的透析速度，常常采取一些措施保持膜两侧浓度差具有最大差，如经常更换透析外液，连续搅动外液。
Ø 透析外液尽量不用纯水，常使用一定pH的低盐缓冲液，这样可以避免袋内样品pH的变化和过分地稀释。
Ø 透析袋出厂时都用10％的甘油处理过，并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。
Ø 透析袋的处理：一般是将透析袋剪成10～20cm的小段，在2％（W/V）NaHCO3和1mmol/L的EDTA（pH8.0）中煮沸10min，用蒸馏水彻底洗尽透析袋，然后放在1mmol/L的EDTA（pH8.0）中煮沸10min，用蒸馏水彻底洗尽透析袋，冷却后，存放于4℃，从此时起取用透析袋，必须戴手套。
Ø 检查透析效果的方法：用1％ BaCl2检查(NH4)2SO4，用1％AgNO3检查NaCl、KCl等。
三、仪器、材料和试剂
l 磁力搅拌器（配搅拌子）
l 试管及试管架
l 透析袋（截留分子量10000）
l 蛋白质氯化钠溶液
l 3个除去卵黄的鸡蛋清与700mL水及300mL饱和氯化钠溶液混合后，用数层干纱布过滤。
l 10%硝酸溶液
l 1%硝酸银溶液
l 1%硫酸铜溶液
l 10%氢氧化钠溶液
四、操作步骤
1. 取10～15mL蛋白质氯化钠溶液，装入处理好的透析袋中，夹紧两端，浸入蒸馏水烧杯中进行1～2h的透析。
2. 用硝酸银检测烧杯中透析液是否有氯离子存在？
ü 1～2mL透析液 数滴10%硝酸溶液至酸性 1%硝酸银溶液
3. 用双缩脲法检测是否有蛋白质存在？
ü 蛋白质溶液在碱性环境下与铜离子反应生成紫红色化合物
4. 透析完全后，检测透析袋内是否存在蛋白质和氯离子？
ü 注意：透析完全时，透析袋内会出现球蛋白沉淀，因为球蛋白不溶于纯水。
五、思考题
1. 透析的一般原理是什么？
2. 蛋白质透析的用途有哪些？
