食用菌摇瓶菌种制作技术：金针菇菌种的制作技术 二
食用菌摇瓶菌种制作技术：金针菇菌种的制作技术 二接种后的试管立即放于22~24℃、空气相对湿度70%左右的通风环境中恒温避光培养，试管的斜面一律向上，每天观察，若有污染及时淘汰，一般经8~13天，菌丝就可长满试管斜面。长满后的试管及时取出使用或放置到3~5℃的冰箱中贮存。用烧过的接种针伸入菌种空白培养基中使其冷却，然后挑取绿豆大小一块带菌丝体的培养基，迅速放入待接种斜面的中心位置，再灼烧试管口，烤一下棉塞并迅速将棉塞塞上。将采集来的种菇切去大部分菌柄后放入清过毒的接种箱内，用0.1%-0.2%的升汞溶液漫泡1分钟后，取出用无菌水冲洗1~2次，然后再用火过菌的棉花或纱和吸干酯体表面水分后，掀开玻璃钟罩，将种菇用铁丝悬挂在培养皿正上方，盖好钟罩，12-8小时后就可在培养皿内看到一层白色粉状孢子。用接种环蘸取少许金针菇孢子于灭菌水中稀释，用无菌注射器吸取孢子液在每支试管斜面上滴上几滴，在22~24℃恒温箱中培养，孢子萌发后，挑取萌发早、长势好
在金针菇的第一、二苍菇中选择菌丝生长健壮有力，子实体生长旺盛、清洁无杂菌及病虫害感染的优质菇作为种菇。进行孢子分离时应选择菌膜即将开裂的种菇。进行组织分离时宜选用七八成熟，孢子尚未散落的种菇。采摘后的种菇要及时分离。
自然状况下，金针菇都处于细菌、放线菌、霉菌等微生物的包围之中，要获得食用菌纯菌种，就必须将食用菌从这些杂菌的包围中分离出来，经过培育提纯才能获得纯菌种，这一过程即为金针菇纯种分离。常用纯种分离方法有孢子分离法和组织分离法。组织分离法操作简单，下代不易发生变异，且能保持原株的优良性状，但生活力不及孢子分离所得的菌种。将采来的种菇切去菌柄，连同75%酒精及接种用具放入接种箱内进行熏蒸消毒。
在接种箱内用75%酒精消毒双手、工具及种菇表面，然后用接种刀切开种菇，在菌柄与菌盖的交界处用接种针挑取米粒大小菌肉，迅速移接入PDA培养基斜面，塞好棉塞，置于22~24℃恒温箱中培养，10~15天即可长满试管。培养过程中要经常检查，如有疑问或杂菌，及时拣出淘汰。
孢子分离法要求技术水平较高，多在科研单位采用。孢子的形成经历了擅子细胞的核配过程、具有双重遗传性，新陈代谢旺盛、发育较强壮，但后代变异性较大，分离时须选择具有优良性状的子实体，并要认真做好出菇试验。
将采集来的种菇切去大部分菌柄后放入清过毒的接种箱内，用0.1%-0.2%的升汞溶液漫泡1分钟后，取出用无菌水冲洗1~2次，然后再用火过菌的棉花或纱和吸干酯体表面水分后，掀开玻璃钟罩，将种菇用铁丝悬挂在培养皿正上方，盖好钟罩，12-8小时后就可在培养皿内看到一层白色粉状孢子。用接种环蘸取少许金针菇孢子于灭菌水中稀释，用无菌注射器吸取孢子液在每支试管斜面上滴上几滴，在22~24℃恒温箱中培养，孢子萌发后，挑取萌发早、长势好的菌落，进一步转管培养。
母种扩接转管或纯化移接一般在接种箱进行，要求空间无菌，操作人员严格遵守无菌操作规程，先将接利箱收拾干净，再用1%~3%的来苏儿擦抹，然后把接种用的接种针、酒精灯、火柴、酒精棉球、消毒液、待转接的灭过菌的斜面试管及分离而得的母种放入接种箱，进行熏蒸消毒或紫外线灭菌。
操作人员穿上经照射消毒的工作服，戴上工作帽，先用1%~3%来苏儿洗手，擦干后再用70%~75%酒精棉球擦一遍，双手伸进接种箱，点燃酒精灯。在酒精灯火焰上方无菌区内，左手拿分离得到的或购买的母种和待接种的斜面试管，右手拿接种针在酒精灯火焰上烧红，然后拔掉试管棉塞，将管口在火焰上烧一下。
用烧过的接种针伸入菌种空白培养基中使其冷却，然后挑取绿豆大小一块带菌丝体的培养基，迅速放入待接种斜面的中心位置，再灼烧试管口，烤一下棉塞并迅速将棉塞塞上。
接种后的试管立即放于22~24℃、空气相对湿度70%左右的通风环境中恒温避光培养，试管的斜面一律向上，每天观察，若有污染及时淘汰，一般经8~13天，菌丝就可长满试管斜面。长满后的试管及时取出使用或放置到3~5℃的冰箱中贮存。
