探究甲状腺激素对小鼠代谢的影响（表皮生长因子受体对小鼠关节软骨表层细胞增殖）

探究甲状腺激素对小鼠代谢的影响（表皮生长因子受体对小鼠关节软骨表层细胞增殖）中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程https://orcid.org/0000-0001-9624-8243(朱洲均)目的：分离并培养小鼠关节软骨表层细胞，验证表皮生长因子受体信号通路对小鼠关节软骨表层细胞的增殖、分化及凋亡的影响。方法：通过纤连蛋白黏附及酶消化法体外分离培养小鼠关节软骨表层细胞并鉴定；取P3细胞分别给予表皮生长因子受体信号通路激动剂转化生长因子α 100 μg/L与抑制剂Gefitinib 10 μmol/L，常规培养基为对照组。通过CCK-8法检测细胞增殖情况同时利用实时荧光定量检测增殖相关基因Ki67的mRNA表达水平；肿瘤坏死因子α(25 μg/L)诱导细胞凋亡，AOEB染色鉴定凋亡情况，实时荧光定量PCR检测抑制凋亡基因Bcl-2与促进凋亡基因Bax的mRNA表达水平；对各组细胞进行

摘要：

文题释义：

表皮生长因子受体：是一种分子质量为170 kD的跨膜糖蛋白，也被称为HER或ErbB受体家族，表达于大多数细胞膜表面；配体与细胞膜外受体结合后，其构象发生了改变，使得细胞内酪氨酸激酶磷酸化，将信号从细胞外传递到细胞内，调控细胞对外界刺激的反应，从而调节细胞的生长、存活、转化及凋亡等多种生物学活动。

转化生长因子α：是第一个被发现的表皮生长因子家族成员，它包含类表皮生长因子域，与表皮生长因子具有相似的结构和功能，在机体内所有组织细胞中，转化生长因子α首先以前肽的形式合成，并固定在细胞膜上，通过分泌信号激活表皮生长因子受体。

背景：表皮生长因子受体是调节细胞周期的关键因子，其介导的细胞下游信号通路广泛参与调控细胞的多种生物学过程，然而该信号通路对小鼠关节软骨表层细胞的增殖、分化及凋亡的影响有待进一步研究。

目的：分离并培养小鼠关节软骨表层细胞，验证表皮生长因子受体信号通路对小鼠关节软骨表层细胞的增殖、分化及凋亡的影响。

方法：通过纤连蛋白黏附及酶消化法体外分离培养小鼠关节软骨表层细胞并鉴定；取P3细胞分别给予表皮生长因子受体信号通路激动剂转化生长因子α 100 μg/L与抑制剂Gefitinib 10 μmol/L，常规培养基为对照组。通过CCK-8法检测细胞增殖情况同时利用实时荧光定量检测增殖相关基因Ki67的mRNA表达水平；肿瘤坏死因子α(25 μg/L)诱导细胞凋亡，AOEB染色鉴定凋亡情况，实时荧光定量PCR检测抑制凋亡基因Bcl-2与促进凋亡基因Bax的mRNA表达水平；对各组细胞进行成软骨、成骨、成脂连续诱导14-21 d，利用实时荧光定量PCR检测软骨相关基因Sox9、成骨相关基因Runx2、脂肪相关基因脂蛋白脂肪酶的mRNA表达水平。

结果与结论：①体外分离培养小鼠关节软骨表层细胞，形态偏长，免疫荧光鉴定阳性表达Prg4；②CCK-8检测结果提示转化生长因子α组细胞增殖能力明显增强，而Ki67 mRNA表达水平显著升高(P < 0.05)；③AOEB染色结果提示转化生长因子α组细胞凋亡水平降低，Bcl-2 mRNA表达水平显著升高，Bax mRNA表达水平显著降低(P < 0.05)；④诱导三系分化实时荧光定量PCR结果显示，转化生长因子α组Runx2 mRNA表达水平显著升高(P < 0.05)，而Sox9的mRNA表达水平显著降低(P < 0.05)；⑤结果表明，表皮生长因子受体信号通路参与关节软骨表层细胞的增殖、分化及凋亡，转化生长因子α介导表皮生长因子受体促进关节软骨表层细胞增殖及成骨分化，抑制其向成软骨分化及凋亡。

https://orcid.org/0000-0001-9624-8243(朱洲均)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 骨关节炎 关节软骨表层细胞 表皮生长因子受体 转化生长因子α 增殖 分化 凋亡

引用本文: 朱洲均 张佳惠 高 健 续 斌 王 超 向 伟 贾昊若 王国胜. 表皮生长因子受体对小鼠关节软骨表层细胞增殖、分化、凋亡的影响[J]. 中国组织工程研究 2023 27(11): 1728-1732.

阅读更多请登录《中国组织工程研究》杂志官网

表皮生长因子受体对小鼠关节软骨表层细胞增殖、分化、凋亡的影响