高效液相测vc优缺点(天能VE-586免疫组化)
高效液相测vc优缺点(天能VE-586免疫组化)创新设计,同时可 以转印四块凝胶操作简便,方便环保样本处理和染色方法1 悬浮细胞的染色:将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞(0.5~1×106)用PBS洗2次,加入100ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V(20ug/ml)10ul,室温避光30min,再加入PI(50ug/ml)5ul,避光反应5min后,加入400ul Binding Buffer,立即用FACScan进行流式细胞术定量检测(一般不超过1h), 同时以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作为阴性对照。2 贴壁培养的细胞染色:先用0.25%的胰酶消化,洗涤、染色和分析同悬浮细胞。3 爬片细胞染色:同上,最后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察。VE-586 转移电泳槽是用来对少量核酸及蛋白质样品进行转移电泳的装置
Western Blot 样品制备要加蛋白裂解液(含有蛋白酶抑制剂),然后冰上研磨,收集于EP管,冰上裂解30min,4度12000rpm离心15min,取上清分装,即得到蛋白样品。建议直接电泳,多余的-80保存。建议分装的蛋白每支略多于一次上样量,一次性用完一支,避免反复冻融。
ELISA样品,直接脑组织冰上匀浆,收集于EP管,同上一样离心,大约220-250ul每支分装(因为ELISA上样量基本都是每孔100ul,做复孔,每个样品2孔,就需要200ul,为了避免不够2孔,分装时要大于200ul每支),直接实验。多余的-80保存,一样避免反复冻融。
不过ELISA最好少量样品进行预实验,或者查阅文献,看看大概组织里有多高浓度,选择合适的试剂盒,测量范围要与组织浓度相符。避免浓度过高测量不准,或者浓度过低,小于试剂盒最低可测浓度。
一、目的
虽然两者都是通过抗原抗体反应对蛋白质进行检测,WB主要还是定性,Elisa可以定性,也可以定量。
WB所检测的一般是抗原,而Elisa抗原抗体都可以检测。
WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小,或是否是多聚体、降解产物等,一句话,WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的;而Elisa无能为力,一锅端了。
二、模式
WB是(抗原-抗体-二抗酶)模式进行检测;Elisa模式有多种,如(抗原-抗体-二抗酶)、(抗原-抗体-抗原酶)、(抗抗体-抗体-抗原酶)、(抗体-抗原-抗体酶)、(抗抗体-抗体-抗原-抗体酶)等等很多很多。
三、抗体的适用性
WB所适用的一抗一般是线性位点的,ELISA线性或构象型抗体都可以使用。从另一个意义上讲,WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定,而Elisa不行。
四、灵敏度
一般Elisa的灵敏度要远高于WB,这从一般酶标记物的使用浓度或待检样品的稀释度上就可以看出。
五、可操作性
WB一次处理量就是一块胶版,10-20个样品最多了。Elisa一块96孔板一次可以处理96个样本,可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。
WB操作常见的非特异性条带,膜本底差,显色不好等等缺点在Elisa上表现得要好得多。
六、商品化度
WB不管怎样,都要自己先做电泳。而Elisa有很多成熟的商品化试剂盒了,只要不怕花钱,检测要方便快捷得多。
样本处理和染色方法
1 悬浮细胞的染色:将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞(0.5~1×106)用PBS洗2次,加入100ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V(20ug/ml)10ul,室温避光30min,再加入PI(50ug/ml)5ul,避光反应5min后,加入400ul Binding Buffer,立即用FACScan进行流式细胞术定量检测(一般不超过1h), 同时以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作为阴性对照。
2 贴壁培养的细胞染色:先用0.25%的胰酶消化,洗涤、染色和分析同悬浮细胞。
3 爬片细胞染色:同上,最后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察。
VE-586 转移电泳槽是用来对少量核酸及蛋白质样品进行转移电泳的装置
操作简便,方便环保
创新设计,同时可 以转印四块凝胶
做到一槽多用,可节省实验空间和经费
性能特点
槽体采用高强度和高透明度的聚碳酸酯材料注塑成型,免除液体渗漏的困扰。
专用开启式转移胶架,操作方便。
可同时转印四块9×9cm凝胶
专用蓝冰盒可反复使用,方便环保。
转印时间为15-60min,也可选择低电压过夜。
具体课程介绍详见后文或戳图片链接
#后续会有更多干货哦#