荧光定量pcr的应用指南（荧光定量PCR那点事儿）

荧光定量pcr的应用指南（荧光定量PCR那点事儿）荧光定量PCR已经广泛应用于医学检验、生物制药、农林牧渔等众多行业中，是我们在科学研究中披荆斩棘的重要法宝。pcr荧光定量实验中所有的试剂Taq Hot-Start DNA Polymerase（热启动Taq DNA聚合酶）、2×Probe qPCR Mix（探针法qPCR预混液）、2×SYBR Green qPCR Mix（染料法qPCR预混液）、One Step RT-qPCR Kit（Probe）（一步法反转录-荧光定量试剂盒（探针法））、实时荧光定量PCR仪等荧光定量相关试剂与仪器，重复性好，灵敏度强，准确度高，操作方便，为您的试验保驾护航！

荧光定量PCR，简称qPCR，就是通过在PCR反应体系中添加荧光基团，收集反应过程中荧光信号的变化情况，从而实现对反应体系的实时监控与定量分析。目前，主流的荧光定量PCR方法有染料法和探针法。

①染料法，就是在反应体系中加入SYBR Green I等荧光染料，它可以与双链DNA结合，并且随着DNA双链的延伸嵌入DNA双链小沟上，发出荧光信号，扩增的产物越多，荧光强度越强。扩增不同的目的条带需要更换不同的引物，但是染料不需要更换，因为它是非特异性的结合到DNA双链上，这是它的优点，也是它的缺点。只要是双链DNA，荧光染料就可以嵌入进去，不会管这个双链是引物二聚体，非目的基因，还是目的基因。

为了避免实验结果的判读，我们使用染料法时，通常会结合溶解曲线进行分析。扩增完毕后，我们会得到大量携带着荧光染料的DNA双链，变性升温过程中，双链解旋，染料被释放，荧光信号降低，根据荧光信号曲线得到DNA解旋的速率，就是我们需要的溶解曲线。在DNA双螺旋结构打开一半的温度时，双链解旋速率最快，在溶解曲线上体现为峰值。如果产物特异性好，则溶解曲线为单峰，出现非特异性扩增或引物二聚体，则出现多个峰值甚至杂乱的峰。

②探针法，就是目的基因扩增时加入特异性的引物与探针。探针是一个小片段核苷酸序列，5’端携带荧光报告基团，3’端携带荧光猝灭基团。扩增过程中，探针首先会完整结合在单链上，此时两端基团距离很近导致荧光报告基团发出的荧光被猝灭基团吸收，随着DNA链的延伸，DNA聚合酶就会水解探针使得荧光基团和猝灭基团分离，释放一个信号，系统就通过采集荧光信号的累积进行实时监控。报告荧光基团有FAM，JOE，VIC等多个种类，对应着不同的检测通道，所以我们可以在一个反应体系中利用多对配套的报告集团与检测通道同时检测多个基因，即多重PCR。结合结果中的CT值，即每个反应管内荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数，就可以轻松实现对样品的定性、定量分析。

荧光定量PCR已经广泛应用于医学检验、生物制药、农林牧渔等众多行业中，是我们在科学研究中披荆斩棘的重要法宝。pcr荧光定量实验中所有的试剂Taq Hot-Start DNA Polymerase（热启动Taq DNA聚合酶）、2×Probe qPCR Mix（探针法qPCR预混液）、2×SYBR Green qPCR Mix（染料法qPCR预混液）、One Step RT-qPCR Kit（Probe）（一步法反转录-荧光定量试剂盒（探针法））、实时荧光定量PCR仪等荧光定量相关试剂与仪器，重复性好，灵敏度强，准确度高，操作方便，为您的试验保驾护航！