elisa的基本原理及类型：揭秘ELISA原理及完善方法

elisa的基本原理及类型：揭秘ELISA原理及完善方法ELISA方法在很大程度上取决于实验的目的和可用的试剂。在许多情况下，研究人员更喜欢使用现成的ELISA试剂盒，因为这些试剂盒经过全面优化，可节省时间、金钱和样品材料。ELISA可以通过多种方式进行配置，所有这些方式都涉及在封闭前将抗原固定到微孔板表面，用抗体进行探测，并测量产生的信号。尽管可以直接固定抗原（一种常用于监测体液中抗体的方法），但夹心ELISA通常是首选，尤其是对于复杂样品，因为它提供了更高的特异性。夹心ELISA（夹心免疫测定法）操作流程如何完善ELISA？选择最适合您需求的ELISA方法

ELSA指将可溶性的抗原或抗体结合到固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的检测方法。

ELISA 是如何工作的？

ELISA基于特异性抗原抗体反应，通常用到的是固相酶联免疫吸附方法，这里以最常使用的夹心法为例，其基本步骤为：

• 将包被抗体固定在微孔板表面
• 从板上洗去未被结合抗体
• 加入质控抗原或含有目标物的样本
• 洗去其他杂蛋白，加入标记的检抗
• 添加酶特异性底物，产生有色产物，使用酶标仪进行比色测定即可

辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶是ELISA中常用的酶，而底物包括四甲基联苯胺(TMB)或2 2'-叠氮基-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)。通常选择重复或三次采样，并且使用不同浓度的样品以确保生物学上可接受的检测范围。

夹心ELISA（夹心免疫测定法）操作流程

如何完善ELISA？

选择最适合您需求的ELISA方法

ELISA可以通过多种方式进行配置，所有这些方式都涉及在封闭前将抗原固定到微孔板表面，用抗体进行探测，并测量产生的信号。尽管可以直接固定抗原（一种常用于监测体液中抗体的方法），但夹心ELISA通常是首选，尤其是对于复杂样品，因为它提供了更高的特异性。

ELISA方法在很大程度上取决于实验的目的和可用的试剂。在许多情况下，研究人员更喜欢使用现成的ELISA试剂盒，因为这些试剂盒经过全面优化，可节省时间、金钱和样品材料。

采取措施解决背景问题

稳健的洗涤技术是最大限度减少ELISA中背景信号的最有效方法之一。优化洗涤步骤的数量、持续时间和体积，以及洗涤缓冲液的去污剂浓度，对于确保去除任何可能影响结果的未结合试剂至关重要。为了获得更一致的ELISA数据。

注意标准曲线

标准曲线对于获得定量ELISA结果至关重要，因为它用于计算未知样品的浓度。出于这个原因，用于生产它的参考材料必须是高质量的，并且有足够的数量，以在分析的整个生命周期内实现可重复的性能。

ELISA数据通常以相对于测定读数的分析物浓度表示，可以是比色，荧光或化学发光。在标准曲线范围内使用更多点（理想情况下为8个或更多）提供了消除异常值的灵活性，并在信号响应范围内更好地定义曲线以改进拟合。对于曲线分析，线性拟合通常适用于夹心ELISA，但4参数逻辑(4PL)模型可以更好地拟合所测量浓度范围的极低端或高端。拟合的正确性可以通过反拟合来验证。

确保可重复性和准确性

可重复性和准确性对于任何免疫测定都是必不可少的，但当定量ELISA 数据用于推动关键决策（例如是否对潜在候选药物进行进一步测试）时，要求可能特别严格。保护措施包括增加重复次数（例如三次重复而不是重复测试），并不仅在每次实验运行中，而且在同一运行中的每个板上合并标准曲线。为了额外保证检测间的重现性，添加另一个内部对照来补充标准曲线可提供更大的结果可信度。作为一般规则，重复读数的变异系数 (CV) 不应超过 20%。

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文章来源于江莱生物（shjianglai666）