小鼠帕金森氏病模型的建立（急性呼吸窘迫综合征）

小鼠帕金森氏病模型的建立（急性呼吸窘迫综合征）组织病理学： 肺损伤后的组织病理观察（HE染色） ： 取右肺4%多聚甲醛固定，然后将肺组织常规脱水，石蜡包埋，切片（厚度为5μm），HE染色。评分方法：取6个视野进行出血及水肿评分。模型评价： Diff-Quik 染色和细胞计数： 获得BALF进行Diff-Quik染色后，显微镜下观察计数计数中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞。 肺的湿/干重比： 肺的湿/干重比是反应肺水肿的直接指标，也是反应肺损伤严重程度的敏感指标。每组处死动物、剪断气管后取全肺，称湿重，然后将肺置于65℃恒温箱中干燥，24h 后取出称干重，计算肺湿/干重比值。 伊文氏蓝测定肺通透性： 在实验结束前30min静脉注射伊文氏蓝（EBD），30mg/kg，实验结束后，开胸剪开右房，冲洗肺循环，完整取出双肺，剪去气管，清洗擦干肺组织，称重后匀浆，以每100mg肺组织1ml的甲酰胺浸泡肺匀浆，37度下孵育24小时，5000r/min

来源：LPS致呼吸窘迫综合征

模式动物品系：SPF级C57bl/6小鼠，雄性，周龄为8w-10w，体重为30g-35g。

实验分组：实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。

实验周期：1 week

建模方法：

模型建立：经腹腔麻醉小鼠，采用暴露式气管切开滴注的方法，经气管向肺内滴注LPS（给药剂量6mg/kg）而后将小鼠直立，垂直旋转小鼠，使药物在肺内均匀分布，从而建立内毒素性急性肺损伤小鼠模型。或者LPS经尾静脉或者腹腔给药，从而建立全身性炎性反应导致的ARDS模型。 在气道滴注LPS 6小时、12小时、24小时及48小时后，各取3只小鼠处死并收集支气管肺泡灌洗液（BALF）及肺组织。 样本收集： 支气管肺泡灌洗液（BALF）抽取方法：小鼠取血后，开胸，分离纵膈，注射器抽取3ml生理盐水从气管插管推入肺中，每次反复灌洗3次后抽出灌洗液，肺泡灌洗液以4℃ 3000r/min离心15min，取上清。 小鼠肺组织收集：肺组织的获取及处理:经腹腔内注射麻醉小鼠，用肝素化的生理盐水1ml经右心室心腔冲洗做抗凝处理，即刻从胸腔中取不同部分肺组织标本。

应用：疾病模型

模型评价： Diff-Quik 染色和细胞计数： 获得BALF进行Diff-Quik染色后，显微镜下观察计数计数中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞。 肺的湿/干重比： 肺的湿/干重比是反应肺水肿的直接指标，也是反应肺损伤严重程度的敏感指标。每组处死动物、剪断气管后取全肺，称湿重，然后将肺置于65℃恒温箱中干燥，24h 后取出称干重，计算肺湿/干重比值。 伊文氏蓝测定肺通透性： 在实验结束前30min静脉注射伊文氏蓝（EBD），30mg/kg，实验结束后，开胸剪开右房，冲洗肺循环，完整取出双肺，剪去气管，清洗擦干肺组织，称重后匀浆，以每100mg肺组织1ml的甲酰胺浸泡肺匀浆，37度下孵育24小时，5000r/min离心，取上清测EBD浓度。

组织病理学： 肺损伤后的组织病理观察（HE染色） ： 取右肺4%多聚甲醛固定，然后将肺组织常规脱水，石蜡包埋，切片（厚度为5μm），HE染色。评分方法：取6个视野进行出血及水肿评分。

标志因子水平： 使用ELISA试剂盒检测肺泡灌洗液（BALF）中TNF-a、IL-6和IL-1β等细胞因子的含量。