酶催化效率指数名词解释（CHO-DHFR-表达系统）
酶催化效率指数名词解释（CHO-DHFR-表达系统）不含谷氨酰胺和酚红，无菌过滤（含碳酸氢钠和Pluronic F-68价格SFM032L-500MLCHO-DHFR-无血清CHO培养基，无动物成分，化学限定
CHO-DHFR-表达系统
货号
品名
规格
价格
SFM032L-500ML
CHO-DHFR-无血清CHO培养基，无动物成分，化学限定
（含碳酸氢钠和Pluronic F-68
不含谷氨酰胺和酚红，无菌过滤
1x 液体培养基
A部分: 基础培养基(液体)
B部分: 无血清生长添加剂（液体））
（英文品名：CHO-DHFR- Serum Free CHO Medium Animal Component Free Chemically Defined）
500ml
SFM032L-1000ML
1000ml
SFM032AP-1L
CHO-DHFR-无血清培养基，无动物成分，化学限定
（含Pluronic F-68，不含谷氨酰胺、碳酸氢钠和酚红，无菌过滤
1x 液体培养基
A部分: 基础培养基（粉末）
B部分: 无血清生长添加剂（液体））
（英文品名：CHO-DHFR- Serum Free CHO Medium Animal Component Free Chemically Defined）
1L
SFM032AP-10L
10L
SFF002P-1L
CHO-DHFR-补料培养基，无动物成分，化学限定
（含葡萄糖和Pluronic F-68，不含谷氨酰胺和酚红）（英文品名：CHO-DHFR- Feed Supplement Chemically Defined Animal Component-Free）
1L
SFF002P-5L
5L
CHO-DHFR无血清培养基 产品编码：SFM032AP
无动物源成分，化学限定
含Pluronic F-68®
不含L-谷氨酰胺和碳酸氢钠和酚红
描述
无血清培养基是在无血清的条件下，培养特定的细胞类型或开展特别的应用。和适合广泛细胞类型的含血清培养基不同，无血清培养基的专一性更强。
SFM032AP是无动物源成分和化学限定的无血清CHO培养基，不含L-谷氨酰胺、碳酸氢钠和酚红。培养基含0.1% Pluronic® F-68，以防止机械力的损伤。
试剂盒包含
编码
内容
A部分
基础培养基，粉末
B部分
生长添加剂
使用说明
制备基础培养基
1.用900ml组织培养级别水重悬19.0g A部分，持续搅拌，直至粉末完全溶解，请勿加热。
2.加入1.60g碳酸氢钠粉末（货号TC230）或21.3ml 7.5％碳酸氢钠溶液（货号TCL013）以配制1升培养基。搅拌至溶解。
3.用1N HCl或1N NaOH将pH调节至低于理想pH值0.2-0.3单位水平，因为pH值在过滤后趋于上升。
4.用组织培养级别水将体积补足至1000ml。
5.立即用孔径≤0.22μM滤器过滤培养基以灭菌。使用正压而非真空抽滤，以减少CO2的损失。
制备完全培养基（SFM032AP）
1. 在2-8℃过夜解冻生长添加剂（B部分）。
2. 在A部分和B部分在放入生物安全柜之前，对两部分瓶子表面喷洒异丙醇进行消毒。
3. 在无菌条件下将B部分全部内容物转移至1L基础培养基（A部分）中，轻轻混合。
注意：如果需要，1L完全培养基中可加入10ml抗生素/抗真菌溶液（货号A002）。
注意：对于谷氨酰胺合成酶表达体系，请勿加入L-谷氨酰胺。不需要加入谷氨酰胺合成酶添加剂。
4. 将完全培养基（SFM032AP）保存在2-8℃直至使用。
细胞适应步骤
原先用含血清培养基培养的CHO细胞，可直接去适应无血清条件或进行细胞驯化。
关键点：
1.在驯化开始之前，细胞应表现健康形态，活力应高于90%。
2.细胞应处于生长对数期的中期。
3.在进入下一步的驯化之前，每一步的细胞应至少传代三次。
4.细胞生长至70%~80%时，应进行传代。
直接适应步骤
1.细胞传代时，直接从含血清培养基转入至SFM032AP，接种密度为0.5X106细胞/ml。
2.在37℃、5-10%CO2和保湿条件下孵育细胞，直到活细胞计数达到1X106细胞/ml。2天后可能需要更换新鲜SFM032AP。
3.在新鲜SFM032AP中以正常接种密度传代。
4.在SFM032AP中细胞传数代，直到细胞完全适应SFM032AP。
血清递减步骤
静息培养
1.细胞从含血清培养基，接种到含血清培养基与SFM032AP比例为75:25的培养液中，接种密度为0.3-0.5X106细胞/ ml。
2.细胞在37℃、5%-10%CO2和湿度环境中孵育。培养瓶盖拧松或使用透气盖以保证气体交换。
3、一旦细胞长到70%~80%，应进行传代。
4.确定细胞密度，重新在含血清培养基与SFM032AP比例为75:25的培养液中接种细胞。
注意：在进入下一步前，每一步有必要细胞传代至少3次。
5.重复第1步至第4步，每一步细胞传代3次。
注意：参考图1以了解每一步细节。
6.在第3步（含血清的培养基：SFM032AP = 25:75）之后，细胞不能直接转为100%无血清中培养。完全不加血清可能改变细胞形态，降低存活细胞数。因此，在100%不含血清之前，维持细胞在10:90，5:95和1：99比例的培养液中生长非常重要。
7.在到达100% 无血清培养这一步时，重复传代直至培养4-6天内能收获1.5 X 106细胞/ml。此时可认为细胞完全适应了SFM032AP无血清培养条件。
图1. 逐级过渡步骤
步骤1
75%含血清培养基：25%无血清培养基（以下简称SFM）
细胞传3代
步骤2
50%含血清培养基：50% SFM
细胞传3代
步骤3
25%含血清培养基：75% SFM
细胞传3代
步骤4
10%含血清培养基：90% SFM
细胞传3代
步骤5
5%含血清培养基：95% SFM
细胞传3代
步骤6
1%含血清培养基：99% SFM
细胞传3代
步骤7
100% SFM
重复传代直至培养4-6天内能收获1.5-2.0X106细胞/ml
细胞完全适应无血清培养基
摇瓶培养
1.细胞传代时，将细胞从含5-10%血清培养基转移至含血清培养基与SFM032AP比例为50:50的培养液中，接种密度为0.3-0.5×106细胞/ml。
2.细胞在37℃、5-10% CO2和保湿环境中孵育，并在轨道摇床上以合适速度旋转。摇瓶盖扭松，方便气体交换。
3.细胞密度超过1×106细胞／ml时进行传代。在驯化过程中始终离心细胞。在每一步可能需要多次传代。
4.逐渐增加SFM032AP与初始培养基的比例（75:25），重悬细胞，重复步骤2
和3。
5.重悬细胞于SFM032AP与初始培养基比例为90:10的培养液中。重复步骤2和3。
6.最后重悬细胞在100%SFM032AP中。重复操作直到细胞均一分布而没有团块，在4-6天培养中密度达到1.5-2×106细胞/ml。这时可以认为细胞完全适应了SFM032AP无血清条件。
可能需要而未提供的材料
L-谷氨酰胺 200mM溶液（产品编码TCL012）
HT培养基添加剂50X液体（产品编码TCL073）
胰蛋白酶-EDTA溶液1X（产品编码TCL007）
大豆源胰蛋白酶抑制剂1X（产品编码TCL068）
质量控制
外观：
A部分：白色至米黄色自由粉末
B部分：无色透明溶液
溶解度：
19.0 g/L时为澄清浅粉色透明溶液
A部分pH值（不含碳酸氢钠）
6.1~6.7
A部分pH值（含碳酸氢钠）
7.1~7.7
A部分的渗透压(mOsm/KgH2O) （不含碳酸氢钠）
230.00—270.00
A部分的渗透压(mOsm/KgH2O) （不含碳酸氢钠）
270.00—310.00
细胞培养反应
通过细胞计数对培养基的促生长能力进行定量评估。
内毒素含量
＜1EU/ml
储存与保质期
基础培养基储存在2-8℃，避光。
无血清生长添加剂储存在-20℃。
在效期前使用。效期见产品标签。
完全培养基的保质期在2-8℃为8周。
注意：不推荐冻存基础培养基和完全培养基。避免生长添加剂的反复冻融。
