聚合酶链式反应的原理与历史（科技名词什么是实时聚合酶链反应）

聚合酶链式反应的原理与历史（科技名词什么是实时聚合酶链反应）实时聚合酶链反应所使用的荧光材料主要分为两大类：荧光染料和荧光探针。荧光染料以SYBR Green为主要代表，荧光探针以TaqMan为主要代表。实时聚合酶链反应，又称实时荧光定量PCR，是利用荧光信号的积累实时监测整个PCR进程，并通过标准曲线对模板DNA进行相对定量分析的方法。该技术于1996年由美国Applied biosystems公司推出，现已被广泛应用于基础科学研究、临床疾病诊断、食品检验检疫、环境监测等领域中。学科：生物化学与分子生物学_方法与技术相关名词：荧光染料 环境监测 荧光探针图片来源：视觉中国

实时聚合酶链反应

real-time PCR

简称：实时PCR

定义：一种定量测定样品中特定DNA序列的聚合酶链反应。即使用标记（最常用是荧光标记）的PCR引物，因而能够通过荧光监测到每一次PCR循环后扩增所得DNA产物的量，从连续监控下获得的反应动力学曲线，可推导得样品中被扩增模板DNA的原初含量。

学科：生物化学与分子生物学_方法与技术

相关名词：荧光染料 环境监测 荧光探针

图片来源：视觉中国

实时聚合酶链反应，又称实时荧光定量PCR，是利用荧光信号的积累实时监测整个PCR进程，并通过标准曲线对模板DNA进行相对定量分析的方法。该技术于1996年由美国Applied biosystems公司推出，现已被广泛应用于基础科学研究、临床疾病诊断、食品检验检疫、环境监测等领域中。

实时聚合酶链反应所使用的荧光材料主要分为两大类：荧光染料和荧光探针。荧光染料以SYBR Green为主要代表，荧光探针以TaqMan为主要代表。

SYBR Green法：游离的SYBR Green不发出荧光信号，但它能够与双链DNA分子结合，而一旦与DNA发生结合即可发出荧光信号。随着PCR反应的进行，PCR产物不断积累，荧光信号强度随之等比例增加，利用荧光信号就可以实时监测PCR反应过程中每一循环扩增产物的变化。最后利用已知浓度的标准品做出标准曲线，计算得到初始模板DNA的相对含量。

TaqMan探针法：TaqMan探针是与目标序列上下游引物之间序列互补配对的一段寡核苷酸片段（30~45bp），其5'端标记荧光发射基团，3'端标记荧光淬灭基团，完整的探针不发出荧光信号（发射基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收）。当PCR反应进行到低温退火时，引物与探针同时与模板结合；延伸合成新链时，Taq DNA聚合酶将探针酶切降解，使荧光发射基团和淬灭基团分离，发出荧光信号，被释放的荧光基团与PCR产物数量成正比。

SYBR Green法成本较低，通用性好，但由于该染料可以与所有双链DNA（如引物二聚体、非特异性扩增产物等）相结合，因此其准确性相对较低。TaqMan探针法特异性好，准确性高，但由于需要设计特异性探针，其成本较高，耗时较长。

PCR技术是由美国科学家凯利·穆利斯于1985年发明的一项具有划时代意义的技术，穆利斯因此获得1993年诺贝尔化学奖。