精子玻璃化冷冻保存技术（人类冷冻精液质量安全专家共识）

精子玻璃化冷冻保存技术（人类冷冻精液质量安全专家共识）·供精者取精过程中微生物感染风险的防控：供精者在精液采集过程中，有效清洁双手及外生殖器可降低精液微生物感染的风险，减少杂菌感染及携带污染，其中消毒方法的选择尤为重要。理想的消毒剂应当具有较广的杀菌/抑菌谱、作用快速等基本特性，还应当具有无毒无味、无刺激等特点。目前，临床上常用的消毒剂有碘复合物消毒剂及一次性消毒湿巾。供精者采集精液前，人类精子库工作人员应对其进行良好的手、外生殖器的清洁流程宣教工作，包括采用讲解、视频宣教及图文宣教等模式，充分让供精者了解有效清洁的重要性，促使供精者按流程操作，认真完成消毒过程。共识建议供精者使用一次性的取精用品，加强有效消毒的宣教，防止供精者取精过程中的微生物感染风险(推荐级别：Ⅱa类)·供精者捐精完成时间及传染性疾病的检测：合格供精者需多次前往人类精子库进行精子采集，每次采集前需禁欲2-7天，直至达到人类精子库冷冻精液库存需求。每位供精者采集次数多为4-

人类精子库是以治疗不育症及预防遗传学疾病和提供生殖保险等为目的，利用超低温冷冻技术，采集、检测、保存和提供精子，为国内经卫生健康行政部门批准开展人类辅助生殖技术的医疗机构提供相关技术服务的机构。截至2020年底，全国已有27家经国家卫健委批准成立的人类精子库。人类精子库的重要任务之一就是为有资质的辅助生殖医疗机构提供健康合格的冷冻精液标本，所以保障外供冷冻精液质量安全是人类精子库最为重要的核心工作之一，包括实验室环境安全、精液标本生物安全、冷冻精液标本质量、标本存储安全和供精标本使用安全等5个方面。

共识主体内容

➦实验室环境设置

·人类精子库实验室洁净度的设定：实验室环境及空气质量是影响辅助生殖技术( assisted reproductive technology，ART) 结局的关键因素之一。空气质量下降会对胚胎发育潜能及ART技术产生负面影响，导致受精率、临床妊娠率、活产率等关键指标的降低。人类精子库实验室为处理冷冻精液的核心区域，其环境的安全性对后续供精ART具有重要影响。目前，人类精子库实验室的环境设置尚无统一标准，建议参照胚胎实验室中精子处理室及冷冻室的设置，据GB50073-2013国家标准设定为万级层流实验室。万级层流实验室每立方米空气中小于一定直径的粒子数量如表1，实验室应为正压通风即出风大于进风速度。共识推荐人类精子库实验室洁净度设定为万级层流实验室(推荐级别：Ⅱa类)

·人类精子库实验室生物安全标准设置：精液为人类精子库实验室最常见的可能带有感染性病原微生物的标本，参照WHO《实验室生物安全手册》第三版，据其相对危害程度，属于能够对人或动物致病，但不易导致严重危害，评估其危险度为2级。参照其危险度等级，建议精液应当在具有二级生物安全水平的实验室内进行检测及冷冻处理。共识推荐人类精子库实验室生物安全标准设置参照二级生物安全标准(推荐级别：Ⅱa类)

·实验室内合理的分区设置：人类精子库的主要任务为：①筛查合格的供精者，为有资质的辅助生殖医疗机构提供合格的冷冻精液；②为有生育力保存需求的服务对象提供生殖保险。人类精子库实验室处理的精液标本来源分为供精者及自精保存者两大类。供精者在进行正式捐精前，需进行一系列的病原微生物及传染性疾病检测包括乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病、支原体、衣原体等，合格后才能成为正式的供精者。自精保存者在精子库进行自体精液冷冻保存前需进行病原微生物及传染性疾病检测，若出现病原微生物或传染性疾病检测结果异常，人类精子库在对其进行充分的冷冻保存及使用风险知情告知后，可提供自体精液保存服务。共识建议实验室内进行合理的分区设置：自存精液标本与供精者标本分区处理，合格阶段供精者精液标本与筛查阶段供精者精液标本分区处理(推荐级别：Ⅰ类)

➦减少供精者病原微生物感染风险

·供精者捐精完成时间及传染性疾病的检测：合格供精者需多次前往人类精子库进行精子采集，每次采集前需禁欲2-7天，直至达到人类精子库冷冻精液库存需求。每位供精者采集次数多为4-7次，大部分供精者均可在2-3月内完成捐精流程。据国家原卫生部2003年颁布的《人类精子库基本标准及技术规范》，应至少每隔半年对供精者进行一次全面检查。为了进一步减少供精者捐精过程中微生物感染的风险，建议供精者于3个月内完成捐精，超过3个月仍未完成的供精者，建议再次进行传染性疾病检测包括但不限于乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病等。共识建议供精者于3个月内完成捐精，超过3个月仍未完成的供精者建议再次进行传染性疾病检测(推荐级别：Ⅱb类)

·供精者取精过程中微生物感染风险的防控：供精者在精液采集过程中，有效清洁双手及外生殖器可降低精液微生物感染的风险，减少杂菌感染及携带污染，其中消毒方法的选择尤为重要。理想的消毒剂应当具有较广的杀菌/抑菌谱、作用快速等基本特性，还应当具有无毒无味、无刺激等特点。目前，临床上常用的消毒剂有碘复合物消毒剂及一次性消毒湿巾。供精者采集精液前，人类精子库工作人员应对其进行良好的手、外生殖器的清洁流程宣教工作，包括采用讲解、视频宣教及图文宣教等模式，充分让供精者了解有效清洁的重要性，促使供精者按流程操作，认真完成消毒过程。共识建议供精者使用一次性的取精用品，加强有效消毒的宣教，防止供精者取精过程中的微生物感染风险(推荐级别：Ⅱa类)

·冷冻精液的细菌培养：细菌感染为精液微生物感染的常见原因，精液细菌感染可通过直接或间接的方式，影响精子的功能，如精液液化时间、精子的活力及存活率等，严重的可以影响精子质量及生精功能，精液中的微生物不利于精子与透明带的结合，会降低精子的受精能力，精液细菌污染还有可能导致胚胎污染，影响ART结局。精液细菌培养是保证冷冻精液质量的重要指标之一，建议每批次供精者的冷冻精液均应进行细菌培养，排除致病菌。共识建议每批次供精者的冷冻精液均进行细菌培养，培养、鉴定出致病菌的冷冻精液标本必须销毁(推荐级别：Ⅰ类)

·人类精子库冷冻保护剂的选择和使用：冷冻保护剂在精子冷冻过程中起到关键作用，减少精子细胞内冰晶的形成、减缓细胞皱缩，从而维持细胞膜的稳定，降低精子的冷冻损伤。常用的冷冻保护剂分为渗透性冷冻保护剂及非渗透性冷冻保护剂。非渗透性冷冻保护剂常用成分为卵黄，在精子冷冻过程中，卵黄能维持精子细胞膜的稳定性，使细胞内水分快速渗出从而减少冰晶的形成。卵黄中的低密度脂蛋白能在精子膜上形成保护膜，保护精子顶体膜在冷冻过程中少受损伤，继而达到较好的冷冻保护的效果，因此含卵黄的冷冻保护剂(TYB)广泛应用于精子冷冻中。共识建议人类精子库使用商品化无卵黄的冷冻保护剂(推荐级别：Ⅱa类)

➦保证冷冻精液标本质量：

·精液取出液化后检测、分装及冷冻的时间管理：精液取出后，室温下几分钟内开始液化，一般在15min内，标本完全液化，液化时间很少超过60min，为保证检测及冷冻质量，应严格控制精液采集到分析的时间间隔。建议尽量减少精液标本冷冻前在体外操作的时间，建议在1小时内完成精液分装并开始冷冻过程。共识建议精液取出液化后即开始检测，1小时内完成分装、开始冷冻(推荐级别：Ⅱa类)

·冷冻精液标本质量抽查管理：冷冻过程中因冰晶形成、渗透压改变等因素不可避免地会引起精子损伤，精子库应选择合适的冷冻保护剂及冷冻方法，尽量减少冷冻损伤。研究发现，冷冻复苏后精子的浓度、复苏率及DNA损伤等不会随着冻存时间的延长而发生明显改变，冷冻精液标本使用的临床妊娠率、流产率及活产率与精子冻存时间长短也无明显相关性，但精子的活力在冻存超过5年时会出现明显下降。共识建议至少每年随机抽查一次冷冻精液标本质量(推荐级别：Ⅱb类)

·关于与生殖中心的对接冷冻精液标本的使用：合格的供精冷冻精液标本由精子库提供给有资质的辅助生殖医疗机构使用。为保证其最佳使用效果，精子库应当对合作的辅助生殖医疗机构冷冻精液标本复苏提供帮助，包含提供常规的标准化的复苏流程，提供针对供精冷冻精液及不同质量的自精保存冷冻精液复苏操作流程，统一冷冻及复苏后精子评估方法等。共识建议对合作的生殖中心提供供精冷冻精液标本常规的标准化的复苏流程及针对不同质量自精保存的冷冻精液复苏操作流程，统一冷冻及复苏后精子评估方法等(推荐级别：Ⅱb类)

➦冷冻精液标本储存安全管理：

·自精保存标本和供精者标本的存储：自精保存标本与供精者标本来源不同，供精者经过筛查阶段系统的查体、精液检查、传染性疾病及病原微生物检测，存在感染的风险远低于自精保存者。自精标本及供精者标本在辅助生殖中的用途也完全不同，精子库提供合格供精者冷冻精液标本给辅助生殖机构，用以帮助不育夫妇，而自精保存标本提供给辅助生殖机构仅限用于自精保存者合法妻子使用。因此，建议自精标本和供精者标本存储于不同的液氮罐内。同时建议如果自精标本有2支及以上的标本时，需要至少分两批放入不同的自精保存液氮罐中，以防止不可预测的损失。共识建议自精保存标本和供精者标本存储于不同的液氮罐内(推荐级别：Ⅰ类)

·供精者冷冻精液标本的分阶段储存：供精者精液标本采集结束后，经过6个月检疫期，复查HIV等合格，才能对辅助生殖机构进行外供。HIV等复查为供精者冷冻精液标本合格的关键时间点，此前，供精者的冷冻精液标本未经检疫，仍有感染HIV等的风险。共识建议供精者冷冻精液标本应分阶段存储于不同的液氮罐中(推荐级别：Ⅰ类)

·自精保存冷冻精液标本载体的选择：液氮浸入非密封性载体，被载体内样品污染，污染的液氮作为传播媒介，污染其他样品。自精保存者进行精子冷冻前，常规会进行传染性疾病及病原微生物检测，结果为阴性方能进行冷冻保存。但由于自精保存者冷冻精液标本的感染风险较大，因此共识建议自精保存冷冻精液标本使用密封载体(推荐级别：Ⅱa类)

·液氮罐的温度、液位的监测管理：保证液氮罐的安全是人类精子库的重要工作之一，传统的人工核查存在漏查、节假日和夜晚无法监控的可能。强烈建议人类精子库使用液氮监控系统监测各液氮罐的温度、液位并定期进行人工复核，做好相关记录。共识建议建议使用液氮监测系统监测液氮罐的温度、液位(推荐级别：Ⅱa类)

➦加强供精发放和用精随访反馈工作：

·关于供精者冷冻精液标本停止外供的标准：供精ART是治疗男性无精子症、严重少弱畸精子症的有效手段。共识建议外供冷冻精液出现8个AID周期未受孕，或者2个供精IVF周期不受精且排除明显女方卵子因素，停止该志愿者冷冻精液标本外供(推荐级别：Ⅱb类)

·关于外供冷冻精液标本子代出生缺陷及遗传风险的评估及处理：出生缺陷是指胚胎发育异常导致的形态、结构、功能、代谢及精神行为等方面的异常，包括先天畸形、智力障碍、代谢性疾病等。建议人类精子库外供冷冻精液标本发生子代有出生缺陷时，应结合具体出生缺陷类型，与遗传学专家一起进行遗传风险评估，遗传风险较高者，应立即停止外供并通知已外供冷冻精液标本停止使用。共识：外供冷冻精液标本子代发生出生缺陷，应进行遗传风险评估，遗传风险较高，停止外供(推荐级别：Ⅱb类)