支气管哮喘不能吃什么东西（哮喘小鼠模型的构建方法）

支气管哮喘不能吃什么东西（哮喘小鼠模型的构建方法）3.激发：雾化吸入，第21天时小鼠放入有机玻璃箱，5% OVA雾化吸入。每天30min，共7d，最后一次致敏后24h内检测。以小鼠出现烦躁不安、呼吸急促、腹肌痉挛等阳性反应作为造模成功的标准。对照组采用PBS雾化吸入，其他操作均相同。2.致敏：小鼠分别于第0、14天时腹腔注射明矾致敏佐剂0.2ml，对照组注射相同剂量的PBS溶液，正常饮食饲养。实验周期：6 weeks建模方法：1.明矾致敏佐剂：10%明矾溶液（溶于双蒸水）2ml与500ug/ml OVA（溶于PBS）2ml等量混合后，用NAOH调PH值为6.5，室温孵育60min，750r/min，离心5min，去掉上清液，重溶于2ml PBS。致敏时每只小鼠腹腔注射200ul，其中含2mg明矾和100ug OVA。

原型物种：人

来源：明矾和OVA致敏的哮喘

模式动物品系：Balb/c小鼠，SPF级，雄性，周龄：4~6周，体重：20g~22g

实验分组：对照组，模型组，阳性药物组，受试药物组，15只每组

实验周期：6 weeks

建模方法：

1.明矾致敏佐剂：10%明矾溶液（溶于双蒸水）2ml与500ug/ml OVA（溶于PBS）2ml等量混合后，用NAOH调PH值为6.5，室温孵育60min，750r/min，离心5min，去掉上清液，重溶于2ml PBS。致敏时每只小鼠腹腔注射200ul，其中含2mg明矾和100ug OVA。

2.致敏：小鼠分别于第0、14天时腹腔注射明矾致敏佐剂0.2ml，对照组注射相同剂量的PBS溶液，正常饮食饲养。

3.激发：雾化吸入，第21天时小鼠放入有机玻璃箱，5% OVA雾化吸入。每天30min，共7d，最后一次致敏后24h内检测。以小鼠出现烦躁不安、呼吸急促、腹肌痉挛等阳性反应作为造模成功的标准。对照组采用PBS雾化吸入，其他操作均相同。

4.末次激发24h麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。取左肺组织于4%多聚甲醛溶液中固定用于病理染色；右肺组织液氮冷冻，-80℃保存用于分生标本。

应用：用于研究哮喘的发病机制，研发治疗和预防哮喘的药物

模型评价：

1.一般观察 哮喘模型组小鼠在激发开始后出现打喷嚏、点头呼吸、呼吸急促、哮鸣音、腹肌收缩、烦躁等典型哮喘发作症状，并且后期观察中发现饮食减少、毛色无光泽、行动迟缓及体重逐渐下降。

2.支气管肺泡灌洗液(BALF)的收集最后1次激发24 h后(第28天)将各组小鼠颈椎脱臼处死，无菌条件下分离气管，结扎左主支气管后 剪开右主支气管插入气管导管并固定，无菌生理盐水灌洗3次，1mL/次，收集的BALF于4℃，1200 R/min离心5 min，弃去上清液，PBS重悬细胞沉淀并涂片，进行细胞分类。

组织病理学：

取左肺组织用4%多聚甲醛固定、脱水、石蜡包埋，4μm切片，HE染色。正常组支气管无明显炎症细胞浸润，结构正常。哮喘组可见弥漫性细小支气管和血管周围炎性细胞浸润，其中嗜酸细胞显著增多。气道上皮有不同程度脱落，支气管豁膜上皮杯状细胞增生，管腔内可见豁液栓及炎性渗出，支气管平滑肌显著增厚，血管周围水肿。

标志因子水平：

模型组血清中IL-25、IL-4的含量显著高于对照组。采用ELISA试剂盒检测血清中IL-25、IL-4的含量。