细胞密度对hif表达的影响（派特灵对HeLa细胞增殖迁移能力及）

细胞密度对hif表达的影响（派特灵对HeLa细胞增殖迁移能力及）目的派特灵能抑制 HeLa 细胞增殖迁移侵袭能力，符合一定量效和时效关系，可能与其影响 PI3K/Akt 信号通路相关蛋白表达有关。https://kns.cnki.net/kcms/detail/11.3495.R.20200629.0948.002.html*《中国实验方剂学杂志》系国家中医药管理局主管中国中医科学院中药研究所和中华中医药学会主办的专业学术刊物，系中国中文核心期刊、中国科技核心期刊、CSCD来源期刊（核心库）、RCCSE权威学术期刊（A ）、中医药科技期刊分级目录T1级期刊。结论

刊于《中国实验方剂学杂志》

网络首发日期：

2020年6月29日

网络首发地址：

https://kns.cnki.net/kcms/detail/11.3495.R.20200629.0948.002.html

*《中国实验方剂学杂志》系国家中医药管理局主管中国中医科学院中药研究所和中华中医药学会主办的专业学术刊物，系中国中文核心期刊、中国科技核心期刊、CSCD来源期刊（核心库）、RCCSE权威学术期刊（A ）、中医药科技期刊分级目录T1级期刊。

结论

派特灵能抑制 HeLa 细胞增殖迁移侵袭能力，符合一定量效和时效关系，可能与其影响 PI3K/Akt 信号通路相关蛋白表达有关。

目的

探索派特灵对 HeLa 细胞增殖迁移侵袭能力及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路相关蛋白的影响。

方法

①将 HeLa 细胞分为空白组，派特灵组（3.906，2.604，1.953，1.563，1.302， 1.116，0.977 g·L-1），加药干预24h，镜下观察细胞形态变化，并采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力，计算派特灵对HeLa细胞的半数抑制浓度（IC50）。

②将 HeLa 细胞分为空白组，顺铂组（0.01 g·L-1），派特灵 高、中、低质量浓度组（2.974，1.487，0.991 g·L-1），采用细胞增殖与毒性检测（CCK-8）法检测派特灵对 HeLa 细胞增殖能力的影响，使用划痕实验检测细胞的迁移情况，采用侵袭实验（Transwell）检测细胞侵袭能 力的变化。

③增设抑制剂 LY294002 组（0.006 g·L-1），采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测派特灵对 PI3K， Akt，重组人 B 细胞淋巴瘤因子-xl（Bcl-xl），B 细胞淋巴瘤/白血病相关 d 蛋白（Bad）表达的影响。

结果

①与空白组比较，镜下观察显示，用药组细胞数目减少，细胞形态不完整；MTT 实验显示，派特灵对 HeLa 细胞增殖有显著抑制作用（P<0.01），计算得出派特灵对 HeLa 细胞的 IC50为 2.974 g·L-1。

②CCK-8 实验显示， 与空白组比较，培养 24，36，48 h，所有用药组均对 HeLa 细胞增殖有抑制作用（P<0.01）；与顺铂组比较，各时间点派特灵中、低质量浓度组对 HeLa 细胞增殖抑制作用减弱（P<0.01）；划痕实验显示，与空白组比较，各加药组均能抑制HeLa细胞的迁移能力（P<0.01），派特灵高质量浓度组细胞迁移率低于顺铂组（P<0.05）；Transwell实验显示，与空白组比较，各加药组HeLa细胞穿膜数减少（P<0.01），与顺铂组比较，派特灵中、低质量浓度组细胞穿膜数升高（P<0.01）。

③Western blot 显示，与空白组比较，派特灵高、中、低剂量及LY294002组的 PI3K，Bcl-xl，Akt 表达量下降（P<0.05，P<0.01），Bad 表达量增高（P<0.01）；与派特灵高 质量浓度组比较，派特灵低质量浓度组的 PI3K，Akt，Bcl-xl 蛋白表达升高（P<0.01），Bad 表达降低（P<0.01）。

内容节选

“派特灵是中国科学院基于大量中医经典古籍研制的中药复方，临床上主要用防治于尖锐湿疣和宫颈疣瘤病变，是一种能够防治HPV感染的中药制剂，已列入国家中医药管理局中国中医药科技开发交流中心中医药科技成果推广项目[（京）卫消证字（2011）第 0220 号]，具有操作简便、副作用少、治愈率高、复发率低等优点，在临床上无论是单独应用还是联合应用都有显著的治疗效果[4]。”

“派特灵是中国科学院研制的中药复方制剂，具有清热解毒、活血化瘀、祛腐生新的功效，临床主要用来防止HPV感染导致的疣瘤病变，其主要成分为苦参、蛇床子、金银花、大青叶、白花蛇舌草、鸦胆子。”

“数药经过加工提纯，祛除有害物质，保留有效成分，既能抑制感染细胞的扩散又同时可清除潜在感染的HPV。”

“本研究发现派特灵能破坏HeLa细胞的正常形态，引起细胞皱缩变形；CCK-8 实验表明，派特灵能够抑制HeLa细胞的增殖，且符合一定的量效和时效关系；Transwell 实验和细胞划痕实验表明，派特灵能抑制HeLa细胞侵袭转移能力，并呈一定的浓度剂量依赖性；Western blot 表明，派特灵能够下调PI3K，Akt，Bcl-xl 蛋 白表达，上调Bad蛋白表达，说明派特灵可能通过抑制 PI3K/Akt 信号转导通路相关抗凋亡关蛋白的表达， 提高凋亡相关蛋白表达，从而抑制 HeLa 细胞增殖迁移和侵袭，起到抗肿瘤作用。”

“本实验研究阐释了派特灵抗宫颈癌的机制，具有良好的临床应用价值，其多靶点作用机制有待进一步实验证。”

论著全文

作者

第一作者：刘运华

刘运华，在读硕士，从事中医药防治再生障碍性贫血的研究。

通讯作者：赵宗江

赵宗江，北京中医药大学教授、研究员、主任医师，医学博士后，博士研究生导师，博士后指导教师。

国家自然科学基金委、北京、浙江、山东及河北自然科学基金委评审专家。国家重点基础研究发展计划（973计划）课题评审专家、北京市科委、北京市朝阳区科委课题评审专家、“南京创业人才321计划”课题评审专家。

曾主持或主要参与了国家、北京市自然基金重点、国家自然基金面上和国家科技部“973”等13项课题的研究工作。主编专著23余部，国家级期刊发表学术论文243篇。