各种超声检测方法的对比(CSTTechTips)
各种超声检测方法的对比(CSTTechTips)对于 ChIP 和 ChIP-seq,理想的片段大小为小于 1000 个碱基对。在超声处理实验步骤中,染色质片段大小取决于超声处理的总时长。就像您在这个超声处理时间进程实验中看到的,超声处理 4、8 或 12 分钟均产生理想大小的碎裂染色质 DNA,并且超声处理时间越长,染色质碎片会偏小。但当我们来看使用这些染色质样本进行靶标富集时,超声处理 4 分钟可产生理想的靶标富集水平。谨惕超声过度!更有趣的是,您可以看到超声处理过度比超声处理不足更糟糕。超声处理过度可能会使靶蛋白脱离 DNA,或使靶蛋白或其抗体表位变性,从而破坏染色质的完整性。因此,我们建议您花一点时间来优化您的实验,以确定获得理想大小的染色质片段所需的最小超声处理程度。
CST ChIP 实验的染色质片段化有两种方法,一种是超声法,另一种是酶解法。无论您采用的是超声法还是酶解法,均需要对样品进行超声处理,超声可以促进细胞和胞核的裂解,以及染色质的片段化。
超声过程中的两个注意点
无论您使用哪种实验步骤,在超声处理期间或间隔应始终把样本放在冰上,以避免样本变热。其次,您需要将超声仪探针的针尖插入到试管的底部,并调整超声仪设置,如波幅,以免超声处理期间出现气泡。否则,您的靶蛋白可能会变性,导致 ChIP 信号丢失。
如何达到最理想的超声效果?
对于 ChIP 和 ChIP-seq,理想的片段大小为小于 1000 个碱基对。在超声处理实验步骤中,染色质片段大小取决于超声处理的总时长。就像您在这个超声处理时间进程实验中看到的,超声处理 4、8 或 12 分钟均产生理想大小的碎裂染色质 DNA,并且超声处理时间越长,染色质碎片会偏小。但当我们来看使用这些染色质样本进行靶标富集时,超声处理 4 分钟可产生理想的靶标富集水平。
谨惕超声过度!
更有趣的是,您可以看到超声处理过度比超声处理不足更糟糕。超声处理过度可能会使靶蛋白脱离 DNA,或使靶蛋白或其抗体表位变性,从而破坏染色质的完整性。因此,我们建议您花一点时间来优化您的实验,以确定获得理想大小的染色质片段所需的最小超声处理程度。