hplc标准曲线的适用范围（HPLC流动相的配制与注意事项）
hplc标准曲线的适用范围（HPLC流动相的配制与注意事项）这三种方式配置得到的流动相组成都是不同的，即使不考虑其他方面因素，保留时间也不会相同。一般情况推荐使用方式1 来配置流动相。方式3：可以先取50ml水到1L容量瓶中然后用乙腈定容。体积混合有三种方式，例如95%乙腈水溶液：方式1：可以用量筒量取乙腈950ml，再量取水50ml，两种液体在瓶内充分摇晃混合。方式2：可以先取950ml乙腈到1L容量瓶中然后用水定容。
一、 HPLC试剂要求
甲醇，乙腈必须为色谱级纯及以上级别，其他试剂也尽量使用色谱级纯，试剂标签上都会标有HPLC字样。水为超纯水或者购买商品化的的纯净水例如屈臣氏。
二、流动相配制注意事项
一般来说，溶剂的混合通常按体积比（V/V）。
体积混合有三种方式，例如95%乙腈水溶液：
方式1：可以用量筒量取乙腈950ml，再量取水50ml，两种液体在瓶内充分摇晃混合。
方式2：可以先取950ml乙腈到1L容量瓶中然后用水定容。
方式3：可以先取50ml水到1L容量瓶中然后用乙腈定容。
这三种方式配置得到的流动相组成都是不同的，即使不考虑其他方面因素，保留时间也不会相同。一般情况推荐使用方式1 来配置流动相。
三、含缓冲盐流动相的配制需注意的事项
配制缓冲盐所使用的盐试剂需为色谱纯，称样需选择量程适宜的天平且每天使用前对天平校正。流动相需过0.45μm或0.22μm滤膜过滤并超声脱气20min以上。若配有在线脱气机可适当减少脱气时间。
注意：不得将装流动相的容器直接放置与超声仪内（容易破碎），需放与筛网上进行超声。
四、调节流动相pH值
采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，调节流动相的pH值的目的是为抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善样品的峰形。
（1）对于弱酸样品，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液。
（2）对于弱碱样品，情况相反。分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）也被称为除尾剂或者减尾剂。
五、流动相的使用注意事项
1）所用流动相必须预先滤过和脱气，流动相一般贮存于玻璃容器内。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化；
2）磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量现配现用，不要长期贮存；
3）容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物；
