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tris缓冲液可以长期保存吗?Tris缓冲液中添加还原剂的作用

tris缓冲液可以长期保存吗?Tris缓冲液中添加还原剂的作用Tris缓冲液通常是在室温下配制的,而还原剂DTT和巯基乙醇在室温下就会降解,缓冲液中若添加了还原剂需要低温冷藏,或者使用时再往Tris里加还原剂。德晟在生物缓冲剂方向有着丰富的生产研发经验,可提供Tris、MOPS、HEPES等多种试剂。[if !supportLists]1. [endif]二硫苏糖醇,简称DTT,通常在蛋白纯化过程的缓冲液中添加DTT,它是常用的小分子有机还原剂,具有抗氧化的作用。化学式为C4H10O2S2,其还原状态下为线性分子,被氧化后变为包含二硫键的六元环状结构。添加浓度是5~10mM,还原剂浓度需要远远高于缓冲液中蛋白浓度。[if !supportLists]2. [endif]三(2-羧乙基)膦,简称TCEP,是一种非常有效的硫醇类还原剂,广泛用作蛋白质化学及蛋白质组学研究中二硫键的定量还原剂。与其他类别的硫醇类还原剂如DTT相比,TCEP不仅是一种高效的二

三羟甲基氨基甲烷Tris缓冲液与核酸以及蛋白质有着良好的相容性,被广泛的应用于各种生物学实验。Tris的缓冲溶液体系非常多,比如Tris盐酸、Tris醋酸、TAE、TBE等,很多缓冲剂中还添加DTT、巯基乙醇或TCEP等还原剂,这是什么作用呢?

tris缓冲液可以长期保存吗?Tris缓冲液中添加还原剂的作用(1)

Tris缓冲剂中添加还原剂的作用

Tris缓冲液中添加还原剂,主要是为了保护蛋白质的稳定,通常是用于蛋白的分离纯化、蛋白质印迹、蛋白鉴定等实验。蛋白由多种氨基酸脱水缩合组成,有些可能含有半胱氨酸残基,它容易被氧化,并且可能导致蛋白质聚集沉淀。所以往Tris缓冲液中添加还原剂DTT,TCEP或者巯基乙醇,来防止上述问题。

Tris缓冲液中三种还原剂

[if !supportLists]1. [endif]二硫苏糖醇,简称DTT,通常在蛋白纯化过程的缓冲液中添加DTT,它是常用的小分子有机还原剂,具有抗氧化的作用。化学式为C4H10O2S2,其还原状态下为线性分子,被氧化后变为包含二硫键的六元环状结构。添加浓度是5~10mM,还原剂浓度需要远远高于缓冲液中蛋白浓度。

[if !supportLists]2. [endif]三(2-羧乙基)膦,简称TCEP,是一种非常有效的硫醇类还原剂,广泛用作蛋白质化学及蛋白质组学研究中二硫键的定量还原剂。与其他类别的硫醇类还原剂如DTT相比,TCEP不仅是一种高效的二硫键还原剂,而且在某些巯基的交联反应中不需要除掉。TCEP稳定性更好,但价格也更昂贵。

[if !supportLists]3. [endif]巯基乙醇,即β-巯基乙醇(BME),可以保护蛋白质上自由的巯基不被氧化,从而避免蛋白质的聚集或变性。它只有一个巯基,还原能力较差,隔两三天就要补加一次保证效果。由于它是挥发性的,因此,可以在池液中加入beta-巯基乙醇,利用它的挥发扩散到液滴中去。

Tris缓冲液通常是在室温下配制的,而还原剂DTT和巯基乙醇在室温下就会降解,缓冲液中若添加了还原剂需要低温冷藏,或者使用时再往Tris里加还原剂。德晟在生物缓冲剂方向有着丰富的生产研发经验,可提供Tris、MOPS、HEPES等多种试剂。

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