细胞毒性试验用于检测tc细胞吗？LDH死细胞检测细胞毒性检测
细胞毒性试验用于检测tc细胞吗？LDH死细胞检测细胞毒性检测1）用培养基洗涤细胞后，调制成5×105cells/ml的细胞悬液。＊因为每种细胞的LDH量不同，为了得到最好的显色效果，推荐做预实验确定最佳细胞量。 ＊配制的Working Solution可用于检测1块96孔板。 二、预实验（细胞数的最佳化）
一、配制Working Solution
1）加1 ml Assay Buffer至Dye Mixture中。
2）完全溶解后转移到Assay Buffer的瓶子中。
＊配好后的Working Solution在避光、0-5℃的条件下可以保存2个月。
＊配制的Working Solution可用于检测1块96孔板。
二、预实验（细胞数的最佳化）
＊因为每种细胞的LDH量不同，为了得到最好的显色效果，推荐做预实验确定最佳细胞量。
1）用培养基洗涤细胞后，调制成5×105cells/ml的细胞悬液。
2）向96孔板中每孔加入100 ul培养基。
3）如图3所示，向96孔板中A行（高对照和低对照各3个孔）加入100 ul细胞悬液后，
用多通道移液器按1/2比例用培养基稀释成一个系列细胞梯度。
另外，准备高对照Blank和背景Blank（只有培养基）各3个孔。
4）在每孔中加入100 μl 培养基。
5）在37 ℃ CO2培养箱中培养。＊培养时间设定跟实际细胞毒性实验培养时间一致。
6）在高对照孔中加入20 μl Lysis Buffer。
7）在37 ℃ CO2培养箱中培养30 min。
8）96 孔板离心2 min(250×g)。
9）从每个孔中吸取100 μl 上清液至新的96 孔板中。＊为了避免吸出细胞，请小心吸取上清液。
10）在每孔中加入100 μl Working Solution。采用包裹铝箔等方法避光，在室温反应30 min。
11）在每孔中加入50 μl Stop Solution。
12）用酶标仪测定490 nm 的吸光度。
表2
结果的计算：
计算「样品孔 - 样品 Blank孔」「 高对照孔 - 高对照 Blank孔」「 低对照孔 - 背景 Blank孔」的
吸光度后，算出n=3 的平均值。细胞损伤率根据如下公式算出。
细胞损伤率(%)=[(A-C)/(B-C)] ×100
A ：样品的吸光度 （样品孔- 样品Blank 孔）
B ：高对照的吸光度 （高对照孔- 高对照Blank 孔）
C ：低对照的吸光度 （低对照孔- 背景Blank 孔）
