免疫细胞冻存久了优势还存在吗(冻存细胞的这些坑)
免疫细胞冻存久了优势还存在吗(冻存细胞的这些坑)含血清免程序降温冻存液4. 程序降温盒导致的细胞复苏不活:放在-80 度的冻存盒,壁太薄,细胞在被迅速降温,使用普通的冻存液抗氧化和抗冻添加物不够,导致细胞内产生大量冰晶杀死细胞.1. 细胞太少:冻存时细胞浓度低于1- 5*10^5CELL/VIAL 复苏很难成功 原因:细胞和细胞间会又间隙接触反应 解决:离心后调整细胞浓度,把细胞种更小的孔板中.2. 培养基很黄时,冻存复苏后几天不长:在细胞生长平顶期冻存的细胞会在解冻后有几天停滞状态,原因:细胞在生长平顶期已经停止生长,冻存后也保持互相间抑制的信号,解决办法:用胰酶消化重新铺板;3. 细胞污染或者有很多小黑点:冻存管的盖子一定要拧紧,否则复苏水浴时会渗水,造成污染。复苏细胞的时候尽量避免冻存管接缝处沾水,防止支原体污染,实验室定期用过氧化氢熏蒸,细胞小黑点增多时用支原体检测试剂盒检测,并且及时清除,趁高温假给细胞来次清洁吧,支原体抑制
冻存细胞的错误时机主要有:细胞量太少,细胞状态不好,细胞变形严重,或者细胞生长堆积,一旦生长过平顶期,培养基就会变得很黄,细胞可疑污染;镜下观察细胞有很多碎片或者不明物;培养时间过长,连续培养超过二个月,细胞性状已有改变)。
解决方法:
选择细胞冻存的最佳时机:细胞增殖旺盛,情况稳定,试验效果良好,复苏后两周内开始冻存一批,再往下传的用来做实验。
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1. 细胞太少:冻存时细胞浓度低于1- 5*10^5CELL/VIAL 复苏很难成功 原因:细胞和细胞间会又间隙接触反应 解决:离心后调整细胞浓度,把细胞种更小的孔板中.
2. 培养基很黄时,冻存复苏后几天不长:在细胞生长平顶期冻存的细胞会在解冻后有几天停滞状态,原因:细胞在生长平顶期已经停止生长,冻存后也保持互相间抑制的信号,解决办法:用胰酶消化重新铺板;
3. 细胞污染或者有很多小黑点:冻存管的盖子一定要拧紧,否则复苏水浴时会渗水,造成污染。复苏细胞的时候尽量避免冻存管接缝处沾水,防止支原体污染,实验室定期用过氧化氢熏蒸,细胞小黑点增多时用支原体检测试剂盒检测,并且及时清除,趁高温假给细胞来次清洁吧,支原体抑制剂买二送一,价格低到您不能想象哦。
4. 程序降温盒导致的细胞复苏不活:放在-80 度的冻存盒,壁太薄,细胞在被迅速降温,使用普通的冻存液抗氧化和抗冻添加物不够,导致细胞内产生大量冰晶杀死细胞.
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5 . -80 度太久导致细胞状态不好,原因:冰箱的温度难以恒定:开门 / 关门过于频繁,冰箱电压不稳等.解决办法:尽快转入液氮。
6. 液氮不足:液面不能漫过所有细胞。解决:定期测量液氮储备,保证细胞全部浸在液面下,小提醒:有几个细胞需要气相保存的,不能浸入液氮里,挪细胞的时候需要注意一下。
7. 取错细胞:找不到 / 拿错冻存管。原因:没有标记好细胞,没有做好库存记录,解决:冻存细胞时在每支冻存管都标上细胞的名称,冻存时间,并记录在册。